植物可溶性糖的测定.pptVIP

实验七 植物可溶性糖的测定 实验原理 糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用生成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关，在650nm波长下OD值与糖含量成正比，由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。 实验器材 实验仪器 ： 分光光度计 恒温水浴锅 分析天平 刻度试管 漏斗 恒温水浴锅 分光光度计 分析天平 实验试剂 乙醚 醋酸铅 草酸纳粉末 实验材料 青菜梗 实验步骤 1 可熔性糖的提取：称取5克新鲜青菜梗于研钵中，加乙醚少许，磨成匀浆，倒入烧杯中，水洗涤，再加蒸馏水30-40ml，然后水浴加热70-80摄氏度，半小时冷却后逐滴加入饱和中性醋酸铅，以除去蛋白质，直至加液时不再出现白色沉淀为止，然后将此混合液连同残渣一并倒入100ml容量瓶中，充分振荡定容，过滤，于事先放有少量草酸钠粉末的三角瓶中，所得的透明液体即为可溶性糖提取液。 实验步骤 2 显色及比色：吸取上述糖提取液1ml，加入5ml蒽酮试剂混合，沸水浴煮10min，取出冷却，在625nm处测OD值，从标准曲线上取得提取液中糖的含量。 3 绘制标准曲线：取标准糖溶液将其稀释成一系列0、20、40、60、80毫克每摩尔的不同浓度的溶液，按上述方法分别测其OD值，然后绘制标准曲线。 计算： 设V为植物样品稀释后的体积 C为提取液的含糖量 W为植物样重 可溶性糖%=CV/W×10 实验结果 OD=0.745 0.745=0.0039.X-0.0096 X=196 可溶性糖=19600/5×10^6×100% =0.392% 注意事项 1 定量实验，且涉及标准曲线绘制，分光光度计的使用，因此溶液配制、材料选取等方面必须精确、仔细一减少误差。 2 实验组、对照组步骤应相同，使结论准确。 3 加中性醋酸铅除蛋白质时，应待沉淀完全。 * * 南京晓庄学院生命科学系