血清总蛋白及白蛋白测定.pptVIP

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实验目的: 1.混合物中某种物质浓度的测定方法 2.熟悉血清总蛋白和白蛋白的测定方法 3.掌握血清总蛋白和白/球比值的临床意义 4.熟悉721分光光度计的使用 生物化学实验基本技能训练 一、血清总蛋白的测定 (双缩脲法) 二、血清白蛋白的测定 (溴甲酚绿法) 血清总蛋白的测定 双缩脲( )在碱性溶液中与铜离子作用生成稳定的紫红色配合物,蛋白质与双缩脲相似,分子中的肽键(—CO—NH—)也能与双缩脲试剂形成紫色的配合物。这种配合物在540nm出有最大吸收峰。吸收度在一定范围内与蛋白质的含量成正比。 (凡分子内含有两个或两个以上甲酰基氨基 ( —CONH— ),不论是直接相连还是通过一个或原子间接相连,都可发生双缩脲反应) 双缩脲反应示意图 实验操作: 取三支试管按下表加入式样,混匀 37摄氏度水浴放置十分钟,以空白管调零,540nm波长测定吸光度 血清总蛋白的测定 项目 测定管 标准管 空白管 血清/ml 1.00 - - 蛋白质标准液/ml - 1.00 - 理生盐水/ml - - 1.00 双缩脲试剂/ ml 5.00 5.00 5.00 血清白蛋白的测定 在pH=4.2环境中,带正电荷的白蛋白(pI=4.9)可以与阴离子染料溴甲酚绿(BCG)结合,溶液由黄变蓝。且颜色的深浅与白蛋白的浓度成正比,此方法可以在不分离白蛋白的情况下直接测定血清白蛋白的含量。 试剂中加入的非离子表面活性剂,可以提高蛋白质与染料的结合力和溶解度,在一定浓度下提高成色的稳定性。 实验操作 1.蛋白质标准曲线的绘制 标准蛋白质溶液的稀释 编号 1 2 3 4 蛋白质标准液/ml 0.10 0.20 0.40 0.60 生理盐水/ml 0.90 0.80 0.60 0.40 稀释后蛋白质 含量/(mg/ml) 1.00 2.00 4.00 6.00 血清白蛋白标准曲线的制作 编号 0 1 2 3 4 生理盐水/ml 0.20 -- -- -- -- 上述1~4管标准稀释液/ml --

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