α-法尼烯合成酶 拟南芥 烟草 表达 亚细胞定位 异戊二烯途径论文.docVIP

α-法尼烯合成酶论文：α-法尼烯合成酶基因转化拟南芥和烟草的研究 【中文摘要】植物萜类是植物挥发物的主要组成成分,主要有由半萜、单萜、倍半萜、二萜、四萜等组成。它们在植物香气组成、昆虫诱导、植物防御、生长调控等方面具有重要作用。α-法尼烯是存在于多种植物的叶片、花和果实中的一种倍半萜类挥发性有机化合物,已知与植物的抗冷性、昆虫的诱导及冷藏苹果和梨果实重大的生理病害-虎皮病的发生有关。α-法尼烯合成酶(AFS)是调控α-法尼烯合成的关键酶、最终酶,它催化FPP转变为α-法尼烯。近年来,通过外源萜类合酶在植物体的表达来研究萜类合成以及异戊二烯途径已经成为国内外研究的热点。根据α-法尼烯合成酶基因全长序列设计特定引物,构建正义表达载体,转化拟南芥,研究α-法尼烯合酶的表达情况;利用多种蛋白质预测软件和原生质体定位研究α-法尼烯合酶在外源植物体中的定位,探讨功能发挥位点和α-法尼烯合酶参与的途径;检测转基因拟南芥、烟草次生代谢物的含量变化,研究α-法尼烯合酶的表达对拟南芥、烟草异戊二烯途径的影响。主要结果如下:(1)构建了pBI-AFS正义表达载体,并转化拟南芥,得到转AFS基因的拟南芥植株。(2)利用RT-PCR的方法和western杂交分析,检测α-法尼烯合成酶在转... 【英文摘要】Plant terpenoids are major component of plant volatiles, mainly consist of hemiterpenes, monoterpenes, sesquiterpenes and triterpenes, which play an important role in plant aroma composition, insect induction, plant defense and growth regulation. As a kind of sesquiterpene,α-farnesene is volatile organic compound, present in various plant leaves, flowers and fruit, and related to plant cold resistance, insects’attraction and physiological disorder -superficial scald of apple or pear fruit during cold storag... 【关键词】α-法尼烯合成酶 拟南芥 烟草 表达 亚细胞定位 异戊二烯途径 【英文关键词】α-farnesene synthase Arabidopsis thaliana tobacco expression subcellular localization isoprenoid pathway 【目录】α-法尼烯合成酶基因转化拟南芥和烟草的研究 中文摘要 7-9 英文摘要 9-10 1 前言 11-21 1.1 植物体内萜类合成途径及关键酶定位研究进展 11-13 1.1.1 植物萜类的合成途径 11-12 1.1.2 植物萜类合酶的定位研究 12-13 1.1.3 异戊二烯合成途径的交互对话 13 1.2 α-法尼烯合成酶的研究进展 13-17 1.2.1 AFS 的特性 14-15 1.2.2 AFS 基因的分离和分析 15-16 1.2.3 AFS 基因的表达及调控 16-17 1.2.4 AFS 基因表达产物的研究 17 1.3 前景展望 17-21 2 材料与方法 21-40 2.1 实验材料 21-22 2.1.1 植物材料 21 2.1.2 菌株与质粒 21 2.1.3 酶及生化试剂 21 2.1.4 PCR 引物 21-22 2.2 实验方法 22-40 2.2.1 CTAB 大量法提取苹果组培苗叶片总RNA 22-23 2.2.2 RNA 反转录 23 2.2.3 苹果α-法尼烯合成酶表达载体的构建 23-26 2.2.4 拟南芥的栽培 26-27 2.2.5 拟南芥花絮侵染 27-28 2.2.6 转基因拟南芥的分子水平检测 28-35 2.2.7 转基因拟南芥、烟草色素含量的测定 35-36 2.2.8 转基因植株萜类和甾醇的测定 36-37 2.2.9 烟草激素含量测定 37-38 2.2.10 拟南芥原生质体定位 38-40 3 结果与分析 40-55 3.1 正义表达载体的构建 40-41 3.2 pBI-AFS-GFP 载体的构建 41-42 3.3 转基因植株的检测及基因的表达分析 42-46 3.3.1 转基因拟南芥T1代的获得及转基因植株的PCR 检测 42-44 3.3.2 转基因植株的表达分析 4