课题土壤中分解尿素细菌分离和计数(2).pptVIP

本课题知识小结: 1.使用选择培养基的目的是（ 　） A.培养细菌　　 B.培养真菌　　 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3　　 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素 课堂训练 C D 之后讲课本P22的最上面内容 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 专题2 微生物的培养与应用 【课题目标】 研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。 【研究对象】 土壤中能分解尿素的细菌 【达到目的】 （1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这 样的细菌 课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 脲酶 + CO2 2NH3 + H2O 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 一、目的菌株的筛选 1、自然界中目的菌株的筛选 （1）依据：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 （2)实例： 从热泉中筛选出Taq细菌 （产生TaqDNA聚合酶） （2）方法——利用选择培养基分离 2、实验室中目的菌株筛选 （1）理论依据：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基 ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 ③培养基选择分解尿素的微生物的原理 1.常用方法：稀释涂布平板法 ——间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。（2）通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 二、统计菌落数目 方法：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法， 还可以用过滤膜法 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)， M代表稀释倍数。 （3）计算公式 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 2、显微镜直接计数 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察。 缺点 想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？ 　　答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。 2、主要目的 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 三、设置对照 1、对照实验 除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验。 A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 一是由于土样不同 二是由于培养基污染或操作失误（或者是混入了其他的含氮物质) 究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 阅读教材P22相关资料，为A同学设计实验 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的