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血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 1.1 根据红细胞上有无 A 抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为 A 型、 B型、AB型和 O型。根据抗 -A 和抗-B 抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定 ABO血型。 1.2 根据抗-D 抗体与对应红细胞抗原的凝集反应， 区分 RhD阳性和 RhD阳性。 2 .标本采集： 用 EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况 下可以使用抗凝动脉血。 婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者， 如不进行反定 型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般 2 小时内）送往输血科。标本采集后 和检测后， 应置于 2~8℃环境下。 检测后的标本应至少保存 7 天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B 血型定型试剂（单克隆抗体） 、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗 体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1 用标记笔在载玻片上划分成 A、B、D三个区域； 5.2 在标记好的玻片上分别加 1 滴抗-A、抗-B 和抗-D 血型定型试剂； 5.3 再各加 1 滴 10%患者红细胞悬液 （该红细胞悬液可以是盐水悬液， 也可以 是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞） ； 5.4 用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开， 使其覆盖大约直径 20mm的面积； 5.5 缓慢连倾斜摇动玻片 1-2min ，观察结果并记录。 6. 结果判定： 6.1 凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2 细胞混匀 2min 后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3 对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 1.1 根据红细胞上有无 A 抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为 A 型、 B型、AB型和 O型。根据抗 -A 和抗-B 抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定 ABO血型正定型。A1细胞上含有 A和 A1抗原，B细胞上含有 B抗原。用已知的 A、 B 细胞检测被检者血清中有无相应的抗 -A 或抗-B 抗体，即反定型。综合正反定 型结果确定受检标本 ABO血型。 1.2 根据抗-D 抗体与对应红细胞抗原的凝集反应， 区分 RhD阳性和 RhD阳性。 2 .标本采集： 用 EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况 下可以使用抗凝动脉血。 婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者， 可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般 2 小时内）送往输血科。标本采集后 和检测后，应置于 2~8℃环境下储存。检测后的标本应至少保存 7 天，以备结果 查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B 血型定型试剂（单克隆抗体） 、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗 体）、血型鉴定专用纸板、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1 取洁净五孔血型鉴定专用纸板，做好姓名标记； 5.2 按纸板标识向每孔中分别加入相应试剂抗 A、抗 B、抗 D血清各 1 滴以 及受检者血清各 2 滴； 5.3 各孔中分别加入受检者红细胞适量及相应所需 3-5％A型、B型试剂红细 胞（自制或商品化试剂）并搅匀，使其覆盖直径 15-20mm的面积； 5.4 轻轻旋转摇晃混匀，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块，边摇边观察； 5.5 3min 以上记录结果。记录观察到的凝集程度或溶血程度。 6. 结果判定： 6.1 凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2 细胞混匀 2min 后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3 对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 三、试管法 1 .原理： 1.1 根据红细胞上有无 A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为 A型、 B型、AB型和 O型。根据抗 -A 和抗-B 抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定 ABO血型正定型。A1细胞上含有 A和 A1抗原，B细胞上含有 B抗原。用已知的 A、 B 细胞检测被检者血清中有无相应的抗 -A 或抗-B 抗体，即反定型。综合正反定 型结果确定受检标本 ABO血型。 1.2 根据抗-D 抗体与对应红细胞抗原的凝集反应， 区分 RhD阳性和 RhD阳性。 2 .标本采集： 用 EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况 下可以使用抗凝动脉血。 婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者， 如不进行反定 型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般 2 小时内）送往输血科。标本采集后 和检测后，应置于 2~8℃环境下储存。检测后的标本应至少保存 7 天，以备结果 查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B 血型定型试剂（单克隆抗