华中农业大学病毒学实验技术应用第六章病毒纯化.pptVIP

Internalization of IHNV particles through clathrin-mediated endocytosis 利用量子点(quantum dots)标记研究病毒的侵入 第六章 病毒的纯化 利用各种物理、化学方法，以不使病毒受损伤和失活为前提，去除宿主细胞组分等非病毒杂质，提取出高纯度浓缩的病毒样品。 病毒微细结构的研究 病毒抗原蛋白的分离纯化 病毒化学成分及其遗传物质的研究 病毒感染的分子细节的研究 一、病毒纯化的标准 保持感染性 具有均一性： 结晶形成 检测病毒制备物均一性的方法： 电镜观察：大小、形态均一 超速离心：沉降速率和密度一致，只出现一条沉降带 电泳：颗粒大小及表面电荷均一，只形成一条电泳带 免疫学方法：只与特异性抗体发生反应 大小、形态、密度、化学组成、分子量、抗原性 二、病毒纯化的理论依据 病毒体外表面的主要化学组成是蛋白质，可利用蛋白质提纯的方法纯化病毒 病毒体具有一定大小、形状和密度，可利用超速离心技术提纯病毒 三、病毒纯化前的预处理 1、病毒感染的组织、脏器或细胞 研磨匀浆 超声波处理 反复冻融 低速离心去掉细胞碎片 2、细胞培养液、鸡胚尿囊液 低速离心去掉可能含有的杂质或直接用于病毒的分离纯化 沉淀法 超速离心法 超滤法 层析法 两相溶剂间分配系数法 吸附法 电泳法 四、病毒纯化的方法