《SBT 10319-1999 熟料消化率测定法(试行)》.pdf

中华人民共和国专业标准 熟 料 消 化 率 测 定 法 (试 行) SB/T 10319-1999 Determination of digestibility of steamed material ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 本方法适用于酿造酱油时在制品熟料的消化率测定。 消化率系指原料经蒸煮后,其中蛋白质可被酶分解为水溶性肽类或氨基酸的百分比, 以此来衡量蒸煮的质量。 1 试剂与仪器 所用试剂都为分析纯。 1.1 酶液 (10%种曲浸出液) 取约20g 新鲜种曲,放入锥形瓶中,加20mL 50%酒精 (酒精: 水 =1 ∶1)混匀,加180mL 水搅拌均匀,置于40 ℃水浴中浸泡 1h,频频摇动,用慢速滤纸或离心机分离 (1500～2000r /min)5min,上清液或滤液用福林法测定蛋白酶活力在100 单位/mL 以上;但酶液的全氮含量 须在0.06% 以下,如不在此范围内,则须加以调节。酶液不必每次都在测定前进行制备。在 几天内可根据需要量,一次制备好,调整好酶活力范围以后置冰箱中备用,但也不宜超过三 天。 1.2 pH 7.2 磷酸盐缓冲液 甲液: 称磷酸二氢钠 (NaH2PO4 ·2H2O) 31.2g,用蒸馏水定容至1000mL。 乙液: 称磷酸氢二钠 (Na2HPO4 ·7H2O) 53.7g,用蒸馏水定容至1000mL。 取甲液28mL, 乙液72mL 混合即成pH 7.2 的磷酸盐缓冲液。 1.3 高速组织捣碎机,型号DS -1(上海标本模型厂制造)功率200W,转速10000～12000r /min 。 1.4 水浴锅 1.5 离心机 1.6 测定酶活力、全氮所用试剂、仪器见有关标准 (ZB X 66030-87 、ZB X 66026-87) 。 2 操作方法 2.1 熟料浆制备 取100g 熟料放入高速组织捣碎机中,加蒸馏水300mL 。盖好盖子,合上开关,捣搅1min 后停机,将飞溅在容器壁上的熟料颗粒用角匙刮下,再继续开机捣碎2min,使熟料捣成均 匀的料浆。停机、开盖,将料浆倒入烧杯内。用四层湿纱布盖好备用。 2.2 测定步骤 2.2.1 精确称取熟料浆6g 左右 (精确到0.2mg)于150mL 锥形瓶内,加入75mL 酶液,再加 入pH7.2 缓冲液20mL 摇匀,在瓶口塞上橡皮塞后,置于水浴锅中。55℃保持2h 取出,拔下塞 子,放在已煮沸的沸水浴中再煮沸10min。取出冷却,转入100mL 容量瓶,定容至100mL。用 慢速滤纸过滤,或离心分离10min(1500～2000r/min) 。弃去开始滤出的滤液5mL 左右。用 移液管精确吸取滤液或上清液10mL,严格按照全氮测定法测定水解液的全氮(TN 水) 。 2.2.2 精确吸取酶液10mL,并测定其全氮含量(TN 酶) 。 2.2.3 精确称取熟料浆2g 左右 (精确到0.2mg),测出料浆的全氮含量 (TN 料) 。 / 3 计算 TN 水×100 -T N 酶×75 消化率(%) =━━━━━━━━━━━×100 T N 料×6 式中:T N 水×100——100mL 水解液所含总氮量, g; T N 酶×75 ——所加75mL 酶液所含的总氮量, g; T N 料×6 ——6g 熟料浆所含总氮量, g 。 4 注意事项 4.1 料浆要尽量捣碎均匀,捣碎后要及时称量。水解用料浆和测定全氮用料浆要紧接 在一起称量, 以免水分蒸发而引起误差。 4.2 酶液可预先制备好。捣碎称量、测定酶液全氮、测