蛋白质共价结构课程.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * s s + 胃蛋白酶 肽段混合物 pH2.0 纸电泳 + _ 暴露于过甲酸蒸气中,使二硫键断裂 转90O + _ 取出偏离对角线的肽段 测序 推断-s-s-的位置 二硫键肽变小，负电荷增多 对角线电泳 Diagonal electrophoresis 植物 昆虫 软骨鱼类 鸟和爬虫类 哺乳类 真菌 两栖类 硬骨鱼类 细胞色素C序列物种差异进化树 五、肽和蛋白质的人工合成 1958年，北京大学生物系在国内首次合成了具有生物活性的8肽--催产素。 1965年 中国科学院生化所、有机所和北大化学系合作，在世界上首次人工合成了结晶牛胰岛素。同时德国也合成了胰岛素。 （一） 肽的人工合成 人工合成一般要经过三个步骤： 1。氨基的保护和羧基的活化 N2H-CH-COOH YHN-CH-COOH YHN-CH-COⅩ R1 R1 R1 2。羧基的保护和氨基的活化 N2H-CH-COOH H2N-CH-COOZ R1 R1 3。接肽并除去保护基团 YHN-CH-COⅩ+ H2N-CH-COOZ YHN-CH-C-N-CH-COOZ R1 R2 R1 R2 H2N-CH-C-N-CH-COOH R1 R2 二肽 O= H O= H Y+Z+Ⅹ (二). 多肽的固相合成法（Solid-phase polypeptide synthesis) 上世纪70年代发展起来的固相合成法是蛋白质人工合成技术上的重大发展。 在固相合成中，肽键的延长是在聚苯乙烯树脂颗粒上进行的。合成多肽的羧基端先和氯甲基聚苯乙烯树脂反应，形成苄酯，第二个氨基酸的-NH2用叔丁氧甲酰基保护后，以NN’-二环己基碳二亚胺(DCCI)为偶联剂, 接在第一个氨基酸的氨基上。重复这个方法，可以使肽链按照一定顺序逐步延长. Peptides of up to 150 residues can be synthesized by automated solid-phase methods mainly invented by R. Bruce Merrifield (who won the 1984 Nobel Prize in Chemistry for this). 多肽合成到最后一步时，把树脂悬浮在无水三氟乙酸中（CF3-COOH)，通入干燥的HBr, 使多肽和树脂分离。同时保护基团也被除去，整个合成过程可在程序控制的自动化仪器上完成。 由于此法在整个合成过程中都是在固体支持物上进行，因此可以省去中间物分离纯化的步骤，因为在固体支持物上合成之后，就可以用充分洗涤的方法，把过量的试剂洗掉，然后进行第二步反应。 缺点： 只要合成时一旦有错，就要错到底。 N，N’-二环己基碳二亚胺 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2，测定步骤 (2)，测定蛋白质分子中多肽链的数目。 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。 蛋白质一级结构的测定 2，测定步骤 (3).二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基