大豆水溶性蛋白质测定法.docVIP

济南海能仪器有限公司 济南海能仪器有限公司 Jinan Hanon Instruments Co., Ltd. 地址：济南市高新区天辰大街677号 Tianchen Avenue No. 677，High-tech Zone, Jinan, China 电话：86-531 Tel: 86-531 传真：86—531ax: 86-531邮箱：hanon01@163.com Email: sales@hanon.cc 大豆水溶性蛋白质测定仪 本标准适用于商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定。 1仪器和用具 1.1凯氏烧瓶：50m1； 1.2圆底烧瓶：100m1； 1.3万用电炉； 1.4锥形烧瓶：100m1； 1.5微量滴定管：5ml、刻度0．01m1； 1.6容量瓶：50m1； 1.7移液管：5m1； 1.8量筒：10ml； 1.9洗耳球： 1.10凯氏微量蒸馏装置(见下图)、胶管等。 凯氏微量蒸馏装置图 1、蒸馏瓶；2、冷凝管；3、承接瓶；4、回流管；5、漏斗； 6、活塞；7、簧夹；8、烧瓶 2试剂 2.1浓硫酸过氧化氢水混合液(2：1：3)：在t00vtl水中缓慢加入浓硫酸 200ml，冷却后再国入30％过氧化氢300ml，混匀备用。此液存放阴凉处可保存一个月； 2.2混合催化剂：硫酸铜(cuso4·5H20)10g，硫酸钾(A．R)100g，硒粉0.2g， 在研钵中研细使通过40目筛，混匀后备用； 2.3 40％氢氧化钠溶液； 2.4 2％硼酸溶液； 2.5 O．01N盐酸溶液； 2.6 甲基红乙醇溶液：0.1g甲基红溶于75ml 95％乙醇中(先在研钵中加乙醇 研磨)； 2.7次甲基蓝乙醇溶液：0.1g次甲基蓝溶于80m195％~．醇中。临用时将以上 两液按2：1比例混合即成。在酸域呈紫红色，在pH5.5时溶液无色，在碱域呈 绿色。 3操作方法 3.1消化 按照含有10～30mg粗蛋白质计算试样用量，一般可称取试样0.2～0．3g(w， 精确到0. 0001g)，用蜡光纸卷着倒入50nnl凯氏烧瓶中，加混合指示剂1g，同 时加入硫酸过氧化氢水混合液3～5m1，稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱 内加热进行消化。开始时用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二，待 泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状 时，再继续加热沸腾l0min，取出待消化液冷却至室温后，加水10～20m1，再 待溶液温度降到室温后，干净地转入50rnl容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用。 3．2蒸馏 按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。 在烧瓶8内加水400ml和少量碎玻璃片，加5滴混合指示剂，加几滴酸液 使水呈紫红色，连接4，1，2，并检查有无漏气处。 量取30m11％硼酸溶液注入锥形瓶3内，加混合指示剂2滴，使冷凝管下端 插入液面下1cm处。量取稀释的消化液5m1，由漏斗5注入瓶1内，再加水10ml， 冲洗漏斗5。量取40％氢氧化钠溶液1m1，提起活塞注入瓶1内，立即用水2～ 5m1冲洗漏斗5，旋紧活塞。这时瓶1内溶液总体积不要超过其容量的一半。 打开簧夹7，关闭活塞6，加热烧瓶8，待瓶1内溶液开始沸腾时开始计时， 经2min降低瓶3，使冷凝管下端露出液面，再蒸馏1min后，用水冲洗管下端。 蒸馏结束后，掐紧簧夹7，断绝蒸气，使瓶l内溶液全部吸入管4中，放松 簧夹7，从漏斗5加入蒸馏水40～50ml，再通蒸气加热和回流，将瓶1洗涤一 次备用。 3．3滴定 用0．01N盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止。 为消除试剂误差，除不加试样外，按照上述操作方法，做一次空白试验。 4结果计算 粗蛋白质的干基含量按下列公式计算： 粗蛋白质(干基%)=（V1-V0）* N * 14 * P *50/V * 10000/W（100-M） 式中：v——蒸馏时取用稀释的消化液体积，ml； V1广实验用去的盐酸溶液体积，m1； v。——空白试验用去的盐酸溶液体积，m1； N——盐酸溶液的当量浓度，N； 14——每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数； P——蛋白质换算系数(小麦5．7，其他谷物及豆类6 25)； w——试样重量，mg； M_试样水分百分率，％。 双试验结果允许差：粗蛋白质含量在15．O％以下时，不超过O 2％；粗蛋