双分子荧光互补技术.docVIP

ISSN　100727626C N　1123870ΠQ 中国生物化学与分子生物学报 2008年8月24(8):767～774 ?技术与方法? 双分子荧光互补技术 樊晋宇 1),2) ,　崔宗强,　张先恩 2) 2)2)3 (1)华中科技大学生命科学与技术学院,武汉　430074;中国科学院武汉病毒研究所　430071) 摘要　双分子荧光互补(bimolecularfluorescencecom,)或体外检测蛋白质相互作用的一项新技术.的2个片段,这2,彼此靠近,重新形成能具有活性的荧光蛋白.BiFC,也可以定位相互作用蛋白质的位点.(FRET)技术联用,还可以检测细胞内多个蛋白质的相互作用.关键词　(BiFC);蛋白质相互作用;检测;定位中图分类号　Q71;Q81 BimolecularFluorescenceComplementationTechnique FANJin2Yu 2) 1),2) ,CUIZong2Qiang,ZHANGXian2En 2)2)3 (1)CollegeofLifeScienceandTechnology,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan　430074,China; StateKeyLaboratoryofVirology,WuhanInstituteofVirology,ChineseAcademyofSciences,Wuhan　430071,China) Abstract　Biomolecularfluorescencecomplementation(BiFC)isarecentlydevelopednewtechniquetodetecttheprotein2proteininteractionsinvitroandinvivo.Thetechniqueisbasedontheprinciplethattwononfluorescentfragmentsofafluorescentproteindissectedatappropriatesitearebroughttogetherandreconstructedtofluorescence,dependingontheassociationorinteractionbetweentheproteinsfusedtoeachfragment.BiFCmethodnotonlyenablesdirectlyvisualizationandlocalizationofproteininteractionsbutalsoissimpleandnoninvasive.Moreover,multiplecolorBiFCsystemsorcombingBiFCandfluorescenceresonanceenergytransfer(FRET)technologymaybeexploitedtodetectthemultipleprotein2proteininteractions. Keywords　bimolecularfluorescencecomplementation(BiFC);protein2proteininteractions;visualization;localization 　　细胞内蛋白质之间的相互作用或形成蛋白复合物在细胞的生命活动过程中起着重要的作用,研究蛋白质的相互作用既广泛又活跃.研究手段也十分丰富,既有体外实验如免疫共沉淀振交 [2][4] [1] 、表面等离子共 [6,7] 切开,形成不发荧光的N和C端2个多肽,称为N 片段(N2fragment)和C片段(C2fragment).这2个片段在细胞内共表达或体外混合时,不能自发地组装成完整的荧光蛋白,在该荧光蛋白的激发光激发时不能产生荧光.但是,当这2个荧光蛋白的片段分别连接到1组有相互作用的目标蛋白上,在细胞内共表 收稿日期:2008201214;接受日期:2008203231中国科学院知识创新工程项目资助 3 、蛋白质芯片等 [3] ,也有体内实验如酵母双杂 [5] 、荧光共振能量转移、蛋白质片段互补等. 双分子荧光互补技术(bimolecularfluorescencecomplementation,BiFC)是近几年出现的一种新技术.该技术简单直观,能够用于体内或体外蛋白质相互作用研究.本文将概要介绍BiFC技术的原理、缘起、特点和应用. 联系人Fax:+862027287199492,E2mail:x.zhang@ Received:January14,2008;Accepted:March31,2008 SupportedbytheKnowledgeInnovationProgram