抗菌药物敏感的试验.pptVIP

* * 抗菌药物的敏感试验? 张德纯 教授 病原生物学教研室? 医院感染近年来已成为全球性的突出问题，其主要原因之一是抗菌药物的使用不当促进耐药菌在病人体内和医院环境中定植繁衍，进而导致的交叉感染和内源性感染日益增多。合理使用抗菌药物的前提之一是要重视感染病原学的实验室诊断和监控抗感染治疗的实验室服务。为临床抗感染治疗的药物选择以及疗效的监测和考核提供实验室依据是临床微生物实验室的重要职能之一。 药物敏感试验包括体外抗菌药物敏感试验、体内抗菌药物活性的测定和药物浓度的测定。 体外抗菌药物敏感试验包括抑菌试验、杀菌试验、联合药敏试验和检测细菌产生的抗生素灭活酶。常用的体外抗菌药物敏感试验有纸片扩散法、稀释法和E试验法。 本章仅对临床微生物实验室常用的体外药敏试验的基本原理和方法进行介绍。  一、临床常用的抗菌药物 抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。 1.???? 青霉素类抗生素 2.?????头孢菌素类抗生素 3.?????其他-内酰胺类抗生素 4.?????氨基糖甙类抗生素 5.?????喹诺酮类抗生素 6.?????大环内酯类抗生素 7.?????四环素、氯霉素和林可酰胺类抗生素 8.?????糖肽类抗生素 9.?????磺胺类药物及增效剂 10.?? 其他合成抗菌药 二、抗菌药物敏感性试验 （一）抗菌药物敏感性试验的意义 抗菌药物敏感性试验（antimicrobial susceptibility test ,AST）意义在于： 1. 可预测抗菌治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败； 2. 指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物； 3. 提供所选择药物的依据； 4. 监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。 （二）药敏试验方法 1 纸片扩散法1）K-B纸片琼脂扩散法 （1）原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 2.?抗菌药物纸片：选择直径6.35mm的新华滤纸含药物纸片，-20℃保存。 3.?培养基：用水解酪蛋白（Mueller-Hinton MH）琼脂。琼脂厚度4mm。9cm内径的平板需倾注25-30ml琼脂，7cm内径的平板需倾注15 ml琼脂。对于营养要求高的细菌在MH琼脂基础上加入血清或血液。  4.?????? 操作步骤： 接种 在已分纯的待测菌平板上挑取4~5个菌落 35℃ 4~6 h3~5mlMH肉汤中 用肉汤调整菌液至 15min 内 0.5个麦氏管（1.5х108/ml） 用无菌 棉签均匀涂布平板（涂布3次，每次旋转平板60 度，最后沿平板内缘涂抹1周） 室温5分钟后 贴纸片（各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm）  35℃ 16-18h  观察结果  5.?? 结果判断：量取抑菌圈直径 抗菌药物敏感性标准分为以下三级：敏感：表示测试菌能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭。中度敏感(中介)：指测试菌可被测定药物大剂量给药后在体内能达到的浓度所抑制，或在测定药物浓集