失活动性骨骼肌萎缩机制与减重步行训练对骨骼肌可塑性的基础研究.pptVIP

失活动性骨骼肌萎缩机制与减重步行训练对骨骼肌可塑性的基础研究 研究内容及意义 研究背景 研究现状 本研究的目的及意义 研究背景 临床上失活动引起骨骼肌萎缩的原因很多， 其中一个重要原因是脊髓损伤。脊髓损伤的 发病率随人民生活水平的提高逐年增加。 骨骼肌萎缩是脊髓损伤的主要并发症之一。 骨骼肌萎缩与失活动导致软组织挛缩，关节 活动受限，健康水平下降，身体耐力下降， 影响脊髓损伤患者的康复。 研究现状 脊髓损伤后骨骼肌萎缩机制不明。目 前认为脊髓损伤后骨骼肌萎缩与可塑 性同其它导致骨骼肌萎缩的疾患如制 动、悬吊、失神经支配等可能存在差 异。 骨骼肌萎缩的研究主要局限于组织形 态学的观察，而分子水平的机制目前不明。 本研究的内容、意义与目的 研究内容：拟采用脊髓损伤动物模型研究 1、失活动后骨骼肌形态学的变化；及早期减重步行训练对骨骼肌形态学的影响。 2、失活动后肌球蛋白重链mRNA表达的变化；及早期减重步行训练能否对肌球蛋白重链mRNA表达有影响。 3、失活动后骨骼肌细胞是否凋亡；早期减重步行训练能否减缓肌细胞的凋亡。 4、失活动后胶原纤维的变化的观察；及早期减重步行训练后能否逆转胶原纤维的变化。 目的：旨在通过研究脊髓损伤后骨骼肌在形态学和细胞、基因水平方面的变化，以及减重步行训练对骨骼肌的影响，初步探讨失活动后骨骼肌的萎缩和可塑性的机制，以及可能、有效的预防治疗手段，为临床预防、治疗失活动性骨骼肌的萎缩提供客观的理论依据。 意义：可填补国内骨骼肌萎缩研 究方面的一项空白。国内目前尚 未有脊髓损伤后骨骼肌萎缩机制的 研究报道。 研究方法与技术线路 研究方法 技术线路 可行性分析 研究方法 动物实验研究 技术线路 动物分组（大鼠） 大鼠脊髓损伤模型的制作 截瘫大鼠减重步行训练 标本取材 各项观察指标的分析研究 动物分组 假性手术对照组； 脊髓损伤未治疗组； 减重步行训练组 大鼠脊髓损伤模型的制作 戊巴比妥钠50mg/kg腹腔注射麻醉后, 显微镜下于Ｔ8～Ｔ10水平，假性手术 对照组行椎板切除术，脊髓损伤未治 疗组和训练组行椎板切除术＋完全脊 髓横断术。横断方法采用后路行椎板 切除术＋T8-10全脊髓横断术。 截瘫大鼠减重步行训练方法 所有大鼠均在术前10天，每日在跑台上以 10.5m/min的速度进行训练。每次10-15分钟， 每日2次，以适应术后开始的减重步行训练。 在脊髓损伤5天后开始减重步行训练，每天2次， 每次15分钟，每周5次。开始先减重量为50％, 以后减重量和速度依据大鼠的能力而定. 跑台速度设为7－10.5m/min之间。 标本取材 将大鼠在戊巴比妥钠麻醉下,迅速将双下肢的比目鱼肌取出，部分立即放入液氮中，-70℃冻存；部分放入－20 ℃冰箱中用于电镜观察，部分放入固定液中，用于光镜观察。 各项观察指标的分析研究 1、肌肉形态学的观察 2、MHC－mRNA各亚型的分析 3、肌细胞凋亡的观察 4、collagen－I、III mRNA的分析 可行性分析 1、动物模型，国内外已经有稳定、可靠的完 全脊髓损伤动物模型，对脊髓损伤动物的喂养 已有较成熟的经验，脊髓损伤动物模型的有关 设备、技术与人员均能解决。 2、设备、技术及人员，骨骼肌的光镜观察、 电镜观察技术成熟，RT-PCR方法以及相关的 试剂、检测设备，以及相关研究人员从事相关 工作多年，技术成熟，经验丰富，结果可靠。 国内外研究概况 研究概况与现状 本课题的主攻关键 本课题的创新之处 本研究存在的主要问题 研究概况与现状 国内外对失活动后骨骼肌的形态学方面的 改变研究较多，但对骨骼肌萎缩与可塑性 的细胞与分子水平的研究较少，目前骨骼 肌萎缩的机制尚不明。不同原因引起的骨 骼肌萎缩的机制可能存在差异。 研究主要着重于制动、失神经支配后骨骼肌萎缩的机制，而对脊髓损伤后骨骼肌萎缩的机制研究，目前文献报道较少。 被动活动、站立负重训练、减重步行训练等康复干预措施对脊髓损伤后骨骼肌可塑性的影响目前国外尚无一致的研究结果，在国内尚属空白。 本课题的主攻关键 明确脊髓损伤后骨骼肌组织形态学方面的变 化、肌纤维类型的转化趋势、骨骼肌细胞的凋 亡，胶原纤维转化的趋势。了解三者之间是否 存在相关性，以及对功能的影响。 探讨脊髓损伤后减重步行训练能否预防、减缓 骨骼肌的萎缩，以及其对肌纤维亚型转化、肌 细胞凋亡与胶原纤维的转化是否存在影响，能 否为临床纠正骨骼