“穷则思变”―当营养物质受限时,看癌细胞如何利用“敌对”环境求生存.docVIP

“穷则思变”—当营养物质受限时,看癌细胞如何利用“敌对”环境求生存 订阅号APExBIO 胰腺导管腺癌(PDAC内的癌细胞形成腺体样结构,包裹在富含胶原蛋白的网状组织中,其中缺乏营养物质和氧气,限制了肿瘤细胞的生存。肿瘤细胞如何改变代谢并在这种环境下存活甚至增殖不得而知。来自法国国家健康与医学研究院(Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale的研究团队首次发现,当面对有限的营养物质时,PDAC细胞可利用胶原蛋白(collagen作为营养源,胶原蛋白衍生的脯氨酸促进TCA循环,并促进细胞的存活和增殖。该论文发表在《Nature Communications》上。 胰腺导管腺癌(PDAC在所有类型的癌症中死亡率是最高的,大部分患者在确诊 后生存期小于2年。PDAC肿瘤具有特殊的组织结构,其中的癌细胞形成腺体结构,被紧密的结缔组织包围,该结缔组织由活化的成纤维细胞,免疫细胞,神经元和致密的胶原蛋白网构成。因此阻碍血管形成,限制化疗药的输送,并导致递送到肿瘤细胞的氧和营养物质减少。 很多研究显示,突变型K-RAS促进葡萄糖代谢,为PDAC细胞提供ATP。此外,突变体K-RAS通过巨胞饮作用大量摄取细胞外可溶性蛋白质作为氨基酸来源,以维持营养应激时的生存和增殖。但这些情况下输送的营养物质有限,体内胰腺肿瘤细胞的营养来源仍然未知。 胶原蛋白主要由成纤维细胞合成,被PDAC微环境中的胞外蛋白酶分解成片段,胶原片段可诱导细胞中的下游信号转导或内吞作用。成纤维细胞胞吞的胶原片段被细胞内蛋白酶降解成单个氨基酸,包括脯氨酸(proline,其占胶原蛋白总氨基酸组成的25%。 胶原蛋白I和IV是人类PDAC中发现的主要胶原蛋白,作者通过免疫组化染色证实PDAC肿瘤富含这些胶原蛋白。并发现相关的蛋白酶如基质金属蛋白酶13,2, 9和脯氨酸肽酶存在于肿瘤微环境中,表达量增加。 作者利用DQ-荧光素缀合的胶原蛋白I或IV来观察蛋白质的摄取和切割。这些荧光团在完整的蛋白质内被淬灭,仅在蛋白质分解后才能观察到荧光。结果发现,在正常氧和缺氧培养条件下都容易观察到胶原蛋白I和IV的摄取。在剥夺葡萄糖或谷氨酰胺时,胶原蛋白I和IV的吸收量在正常氧细胞中都显著增加;然而,在缺氧细胞中没有观察到相同程度的增加。在剥夺葡萄糖后,巨胞饮抑制剂EIPA 增强荧光,而剥夺谷氨酰胺无此作用。当葡萄糖低时,缺氧会钝化EIPA的作用。表明剥夺葡萄糖或谷氨酰胺促进了PDAC细胞对胶原I和IV蛋白的摄取和分解,分别依赖和独立巨胞饮作用。 除了巨胞饮作用之外,胶原摄取的另一种机制是由胶原受体uPARAP / Endo180介导的内吞作用。在小鼠和人PDAC样品中,uPARAP / Endo180在PDAC中高度表达并且定位于腺体样结构。 在培养PK4A细胞72小时后,没有葡萄糖补充的情况下,发现可溶性或涂层胶原蛋白的补充显著增加胰腺癌细胞的存活。而EIPA降低细胞存活率,进一步表明在葡萄糖限制条件下胶原蛋白的巨胞饮促进细胞存活。在K-RAS的下游,发现在葡萄糖和谷氨酰胺缺乏条件下,胶原蛋白增加ERK1 / 2磷酸化,但是几乎不影响下游mTORC1信号的传导。因此,胶原蛋白既能挽救胰腺肿瘤细胞的存活,也可以增加葡萄糖和/或谷氨酰胺缺乏后的ERK1 / 2通路的活化,而不影响mTORC1信号级联。 参与脯氨酸代谢的酶PRODH1在PDAC细胞中高表达。在营养有限(1mM葡萄糖和0.5mM谷氨酰胺的条件下,DHP(PRODH1的竞争性抑制剂会降低细胞的存活和增殖,而加入过量的游离脯氨酸可以拯救DHP处理细胞的存活和增殖。表明在葡萄糖和谷氨酰胺受限制的条件下,脯氨酸的分解代谢可以促进细胞的存活和增殖。有趣的是,阻断脯氨酸的代谢显著增加在低谷氨酰胺条件下培养的细胞的糖酵解活性。即当谷氨酰胺受限时,脯氨酸降解可以作为葡萄糖替代营养来源。敲除PRODH1基因,限制了胰腺癌细胞应对营养物质受限的能力,阻碍细胞在裸鼠中的成瘤能力。 作者利用[U-13C] - 脯氨酸来追踪脯氨酸在PDAC细胞的代谢。 当营养物被剥夺时,观察到游离的U-13C-脯氨酸从ECM(细胞外基质积累到PDAC 细胞中,证实PK4A细胞能够从ECM中摄取脯氨酸。在葡萄糖或谷氨酰胺受限的条件下,在PDAC细胞的所有TCA循环中间体中发现脯氨酸标记。DHP的处理降低了细胞的氧消耗。这些数据表明胶原衍生的脯氨酸至少部分通过支持TCA循环代谢和细胞呼吸来促进营养限制下的细胞增殖。 总之,肿瘤细胞主要通过巨胞饮作用摄入并降解ECM蛋白,包括胶原I和IV,胶原衍生的脯氨酸在营养有限的条件下支持TCA循环代谢。本文展现了当营养物质受限时,癌细胞如何利用