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生化检验中胆红素测定的 常见问题及解决方案 问题一 如何测定高浓度胆红素溶液 稀释法 为方便理解，胆红素单位使用mg/dl 待测样本浓度为X mg/dl，体积为V1；正常人血清浓度为a mg/dl，体积为V2。 将两者混合，测定混合血清浓度为Y，体积为V3。 根据质量守恒定律： aV2+XV1=YV3 等量变换后： 待测样本浓度X=（YV3-aV2）/V1 通常情况下，V3=V1+V2，带入公式后： 待测样本浓度X=Y+（Y-a）V2/V1 注意：溶液体积与气压、温度有关，且浓度越相近的溶液混合后体积变化越小，在密度比水大的溶液混合时，混合溶液的浓度会向浓度小的偏离，即Y小于真值，使得结果X偏小，所以在选择稀释液稀释液使用正常人血清比用蒸馏水更好。 问题二 婴幼儿（新生儿）胆红素结构如何影响测定结果 正常血清中存在的胆红素按其性质和结构不同可分为两大类型。凡未经肝细胞结合转化的胆红素，即其侧链上的丙酸基的羧基为自由羧基者，为未结合胆红素；凡经过肝细胞转化，与葡萄糖醛酸或其它物质结合者，均称为结合胆红素。 由于其结构和性质不同，它们对重氮试剂的反应（范登堡试验Van den Bergh test）不同，未结合胆红素又称“间接反应胆红素”即“IBIL”，结合胆红素又称“直接反应胆红素”即“DBIL”。 新生儿胆红素特点： 胆红素产生相对过多 胎儿在宫内低氧环境中生活，红细胞数相对地较多，若出生时延迟结扎脐带或助产人员有意从脐带向新生儿挤血，则红细胞数量更多。胎儿红细胞寿命较短（70～100天），故产生胆红素的量亦多。出生后开始用肺呼吸，血氧分压升高，过多的红细胞迅速破坏，使血中非结合胆红素增加更多。成人每日生成胆红素约65.0μmol/L（3.8mg/kg），新生儿每日生成胆红素约为145.4μmol/L（8.5mg/kg）相当于成人的2倍，因此新生儿肝脏代谢胆红素的负荷大于成人。 2.胆红素与白蛋白联结运送的能力不足　　新生儿出生后的短暂阶段，有轻重不等的酸中毒，影响胆红素与白蛋白联结的数量。早产儿血中白蛋白偏低，更使胆红素的联结运送延缓。 3.肝细胞摄取非结合胆红素的能力差　　新生儿肝细胞内缺乏Y蛋白及Z蛋白（只有成人的5～20%），在生后第5日才逐渐合成。这两种蛋白具有摄取非结合胆红素，亦转运至滑面内质网进行代谢的功能，由于Y、Z蛋白的合成不足，影响了肝细胞对非结合胆红素的摄取。4.肝脏系统发育不成熟　　新生儿肝脏的葡萄糖醛酸转移酶和尿嘧啶核苷二磷酸糖脱氢酶（UDPG脱氢酶）不足或受抑制，不能将非结合胆红素转变为结合胆红素，以至非结合胆红素潴留血中而发生黄疸。此类酶在生后1周左右才开始增多，早产儿更晚。5.肠肝循环增加　　新生儿生后头几天，肠道内正常菌群尚未建立，因此随胆汁进入肠道的结合胆红素不能被还原为粪胆元；另方面新生儿肠道中有较多β-葡萄糖醛酸苷酶，能将结合胆红素水解为非结合胆红素，后者被肠粘膜吸收，经门静脉返回至肝脏，这是新生儿肠一肝循环的特点。其结果是使肝脏代谢胆红素的负担增加，而致非结合胆红素潴留血中。 总的来说，新生儿黄疸常表现为高未结合胆红素黄疸，即含有大量“IBIL”。 化学氧化法为现行常见的胆红素检测方法，以钒酸盐氧化法为例： 直接胆红素的测定原理为：直接胆红素（结合胆红素）+矾酸钠=胆绿素（450nm吸光度变化） 总胆红素的测定原理为：1.间接胆红素（未结合胆红素）+表面活性剂2.所有胆红素+矾酸钠=胆绿素（450nm吸光度变化） 新生儿黄疸的血清由于含有高浓度的IBIL，在TBIL测定时，IBIL被大量活化，矾酸钠迅速被消耗完，造成检验结果比真值偏低；而做DBIL测定时就不会有这样的情况。