分离工程 膜亲和过滤法..pptVIP

第七章 膜亲和过滤法 对生物大分子分离纯化的要求:高纯度、高质量、低成本产品，传统分离方法的局限，寻找经济有效的新型分离途径。 特点： 生物体可以合成纯化学法难以制备的化合物，合成产物浓度很低(0.01％),成分极其复杂 要求： 高处理量、高纯化比和低产物损失率 亲和分离：产品回收和高纯化高效方法 亲和分配、亲和沉淀、亲和色谱 亲和色谱 选择性、特异性极强，填充柱技术受限(流速低、填充颗粒压缩、扩散传递慢)柱效低，不易大规模应用 特点：处理量小、产品纯度极高 膜分离技术：生物大分子纯化分离的有力工具 特点：处理量大，可大规模操作，利用膜孔径大小分离，纯度较低。 两种技术各有特长和不足 表7．1 膜分离和亲和色谱的比较 膜亲和过滤法 自80年代中期，把这两种技术结合，发挥各自长处，出现了膜亲和过滤方法。 分类 ① 亲和膜分离技术 制备带亲和配基的膜．直接分离产物 ② 亲和-错流膜过滤 将水溶性或非水溶性高分子亲和载体与产物进行特异反应，用膜进行错流过滤 7．1 亲和膜分离技术 7.1.1 基本过程和操作方式 A．分离过程 ① 分离膜的改性 （接间隔臂） ② 亲和膜制备 (生成含亲和配基的膜分离介质) ③ 亲和络合 ④ 洗脱 （改变条件解离） ⑤ 亲和膜再生 将水解的尼龙66微孔膜用二溴丙烷活化，接上己二胺作间隔臂，再用戊二醛法固载上组氨酸，制得的亲和膜可去除氨基酸注射液、牛血清蛋白、溶菌酶等医药制剂中的内毒素，去除率90％ B．膜亲和分离需解决的几个关键问题 ①膜表面有化学基团，能活化，接上合适的间隔臂和配基； ②表面积、孔径足够大，生物大分子可自由地出入膜； ②孔分布窄且均匀-通透量和分离效能高 ④加压操作，要求膜有机械强度，长期使用不变形； ⑥耐酸、碱、高浓度缓冲液和有机溶剂 C. 亲和膜的分离操作方式 ① 亲和超滤过程 错流方式(Cross Flow) 优点: 膜有双重的分离作用，既可分离所需生物大分子，又可去除部分溶剂，达到浓缩的目的。 ② 微孔亲和膜过滤过程 混合物通过膜时，只有和膜亲和配基产生相互作用的物质被滞留在膜上，其余物质均随冲洗剂通过膜流走 目前多数采用此种方式 亲和膜组件形式 板式、圆盘式、中空纤维式 7.1.2 基本理论 Suenc用对流、扩散和Langmuir 吸附理论对亲和膜分离过程作了数学分析．推导出了蛋白质和配基之间形成的络合物浓度与蛋白质浓度和配基浓度之间的关系式。 假设样品溶液以层流方式沿着轴向通过已固载化上配基的多孔膜层．蛋白质在膜上的吸附是等温吸附过程， 料液浓度为c0 ， 膜上配基浓度为ci， 蛋白质和配基形成 的络合物浓度cs 另假设： ①溶质在径向的浓度梯度忽略不计。 ②边界层上的质量传递时间 dp/kc L/v轴向对流时间，Athalye关系式： 式中 Dp 为填充床微粒大小; dp膜孔径;D为轴向扩散系数； kc 为边界层质量传递系数； ?为膜孔隙度； Re、 Sc为Reynolds和Schmids数 Re Sc= Dp? u/D 膜截面上的质量平衡连续方程 非稳态项 对流项 轴向扩散项 吸附项 根据边界条件和初始条件分别得出： ①包括轴向扩散在内的蛋白质吸附等温线方程 式中 ?、?、C、Cs分别为距离和浓度的比率；Pe为轴向(Peclet)准数；m为配基对进科蛋白的比率；n为传递单位数，r为无因次分离因子 ②忽略轴向扩散的可逆吸附等温线方程 式中 I0为零次贝塞尔方程修正； x=n/r ；y＝nT。 7.1.3 基质材料 常用的亲和色谱的固体填料： 葡聚糖、琼脂糖、 纤维素、聚丙烯酰胺、 聚羟乙基甲基丙烯酸酯、 多孔玻璃和硅胶等 亲和分离基质材料： 纤维素及其衍生物， 聚酰胺(PA)及其衍生物， 聚丙烯酰胺及其衍生物， 羟乙基甲基丙烯酸酯， 三羟甲基酰胺、聚砜等， 亲和