环境微生物学第3章.pptVIP

(2) 平板分离法平板分离法是应用最广的一种分离纯培养的方法，包括稀释倒平板法、涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法等。 1) 稀释倒平板法是先将待分离的材料用无菌水作一系列的10倍递减稀释，然后分别取不同稀释液，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。2) 涂布平板法是更常用的纯种分离方法。3) 平板划线分离法是用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行、扇形等形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。4) 稀释摇管法是稀释倒平板法的一种变通形式，适于厌氧微生物的纯培养。 (2) 渗透压的控制　 等渗环境适宜微生物生长；高渗环境会使细胞脱水，发生质壁分离；低渗环境会使细胞吸水膨胀，甚至导致胞壁脆弱和缺壁细胞(如支原体和原生质体等)破裂。  (3) 氧化还原电位的控制　 各种微生物对氧的需求不同，氧化还原电位可作为供氧水平的指标。  4.灭菌 培养基配制后应及时彻底杀死培养基中的杂菌，避免微生物污染或改变培养基的化学组成。对培养基一般采用高压蒸汽灭菌，即在1.03×105Pa压力121℃条件下灭菌15～30min。灭菌对培养基会产生不利影响，如热敏性物质糖类会形成氨基酸、焦糖，磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子形成沉淀，因此，对含糖培养基常在0.55×105 Pa压力112℃进行灭菌，维持15～30min。为了避免形成沉淀，常在培养基中加入少量螯合剂,如乙二酰四乙胺(EDTA)。 5.原料来源的选择 配制培养基时应尽量利用价廉且易于获得的原料作为培养基成分，特别是在发酵工业生产中，以降低生产成本。在工业发酵及其他微生物生产中，选择培养基原料时，除了必须考虑原料要满足微生物的营养及工艺要求外，原料选择应遵循价廉物美、来源丰富、运输方便、无毒性的原则。如选择碳源时，应选用富含淀粉的薯类、废糖蜜、麸皮、酒糟、酱渣及纸厂含有戊糖等成分的亚硫酸废液等来代替纯淀粉和糖类；选择氮源时，用棉子饼粉、蚕蛹粉、豆饼粉及花生饼粉等副产物代替黄豆粉等蛋白质原料。3.3.2　培养基的类型及应用 3.3.2　培养基的类型及应用 1.根据培养基成分的不同划分2.根据培养基物理状态划分3.根据试验目的和培养基的用途划分 1.根据培养基成分的不同划分 1) 合成培养基(Synthetic medium)又称化学限定培养基(Chemically defined medium)，它是由化学成分和量都确切知道的物质配制而成的培养基。2) 半合成培养基(Semi-synthetic medium)　又称半组合培养基(Semi-defined medium)，是指一类主要用已知化学成分的试剂配制，同时又添加某些未知成分的天然物质制备而成的培养基。3) 天然培养基(Synthetic medium)　又称非化学限定培养基(Chemical undefined medium)，是指用化学成分并不十分清楚或化学成分不恒定的天然有机物质配制而成的培养基。 2.根据培养基物理状态划分 1) 液体培养基(Liquid medium)　指未加入任何凝固剂(Gelling agent)而呈液体状态的培养基。2) 固体培养基(Solid medium)　在液体培养基中加入一定量的凝固剂，使其外观呈固化状态的培养基即为固体培养基，或直接用马铃薯块、胡萝卜条等作为天然固体培养基。3) 半固体培养基(Semi-solid medium)　指在液体培养基中加入少量凝固剂而制成的硬度较低的固体培养基。 表3-9　琼脂与明胶生物与理化性能比较 3.根据试验目的和培养基的用途划分 1) 基础培养基(Minimum medium)　基础培养基指含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养成分的培养基，它能适应绝大多数微生物的生长繁殖。2) 加富培养基(Enrichment medium)　加富培养基又称营养培养基或增殖培养基，指在基础培养基中加入某些特殊需要的营养成分配制而成的培养基，用于培养对营养要求比较苛刻不易培养出来的微生物；或者使目的微生物快速增殖，并逐渐富集而占优势，达到淘汰其他微生物的目的。3) 选择培养基(Selective medium)　用于从混杂的微生物群落中选择性地分离出某种或某类微生物而特殊配制的培养基称为选择性培养基。4) 鉴别培养基(Differential medium)　用于鉴别不同微生物类型的培养基称为鉴别培养基，主要用于微生物的鉴定与分类。 表3-10　常用的鉴别培养基及其用途 3.4　营养物质进入微生物细胞的方式 3