第十章维生素的测定2.pptVIP

第十章 维生素的测定;一、概述;维生素化学结构各异，生理功能也各不相同，化学结构上没有共性。大多数维生素不稳定，对光照、氧气、PH值和加热都非常敏感。 胺类（VB1） 醛类（Vb6） 醇类（Va）等 ;富含维生素的食品;为什么检测维生素;脂溶性V的测定; 3．耐热性、耐氧化性： 耐热性 氧化性 VA 好，能经受煮沸 易被氧化 （光、热 促进其氧化） V D 好，能经受煮沸 不易被氧化 V E 好，能经受煮沸 在空气中能慢慢被化 （光、热、碱促进其 氧化） ; 根据上述性质．测定脂溶性维生素时，通常： 皂化样品 水洗去除类脂物 有机溶剂提取脂溶性维生素(不皂化物) 浓缩 溶于适当的溶剂 测定。 在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂(如焦性没食子酸、维生素C等)。 对于A、D、E共存的样品，或杂质含量高的样品，在皂化提取后，还需进行层析分离。;1、维生素A的测定----三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003） 维生素A的测定常用的方法有三氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色谱法。 （1）原理 ;（2）适用范围及特点 本法适用于维生素A含量较高的各种样品（含量高于5～10μg/g）。 该法的主要缺点是生成的蓝色配合物的稳定性差，比色测定必须在6S内完成，否则蓝色会迅速消退，将造成极大误差。 ;（3）试剂 无水硫酸钠、乙酸酐 无水乙醚（不含过氧化物） 无水乙醇（不含醛类物质） 三氯甲烷（不含分解物和水） 250g/L三氯化锑—三氯甲烷溶液 1+1氢氧化钠溶液、0.5mol/L氢氧化钾;（4）测定步骤 ;A、皂化法:适用于维生素A含量不高的样品，但全部试验过程费时，且易导致维生素A的损失。 皂化:称取0.5～5g经组织捣碎机捣碎或充分混匀的样品于三角瓶中，加入l0ml 1：1氢氧化钾及20～40ml乙醇，在电热板上回流30min。加入10m1水，稍稍振摇,若无浑浊???象，表示皂化完全。 ;提取 将皂化液移入分液漏斗，先用30ml水分两次冲洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗。再用 50ml乙醚分两次冲洗皂化瓶，所有洗液并入分液漏斗，振摇2min，提取不皂化部分。; 静止分层后，水层放入第二分液漏斗。皂化瓶再用 30ml乙醚分两次冲洗，洗液倾入第二分液漏斗，振摇后静止分层，将水层放入三角瓶，醚层并入第一分液漏斗。如此重复操作，直至醚层不再使三氯化锑一三氯甲烷溶液呈蓝色为止。 ;洗涤 在第一分液漏斗中加30ml水，轻轻振摇，静止片刻后，放出水层。再加入15～20ml 0.5mol/L的氢氧化钾溶液，轻轻振摇后，弃去下层碱液（除去醚溶性酸皂），继续用水洗涤，至水洗液不再使酚酞变红为止。醚液静置10～ 20min后，小心放掉析出的水。 ;浓缩 将醚层液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约25ml乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠两次，洗液并入三角瓶内。用水浴蒸馏，回收乙醚。待瓶中剩约5ml乙醚时取下。减压抽干，立即准确加入一定量三氯甲烷（约5ml左右），使溶液中维生素A含量在适宜浓度范围内(3～5μg）。;B、研磨法 适用于每克样品维生素A的含量大于5～10μg样品的测定，如猪肝的分析。步骤简单、省时，结果准确。 研磨 精确称取2～5g样品，放入盛有3～5 倍样品质量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。;提取 小心地将全部均质化的样品移入带盖的三角瓶内，准确加入50～100ml乙醚。紧压盖子，用力振摇2min；静置澄清（大约需1～2 h），或离心澄清（保持低温）。 浓缩 取澄清提取乙醚液2～5m1，放入比色管中，在70～80℃水浴上抽气蒸干；然后立即加入lml三氯甲烷溶解残渣。 ;②标准曲线的绘制; 于620nm波长处，以 10ml三氯甲烷加 1滴乙酸酐调节吸光度至零点；然后将标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加