食品毒理学动物检验检疫技术1.pptxVIP

第二章动物检验检疫技术食源性疾病尤其是动物性食品引起的疾病在全球范围内呈上升趋势。造成食源性疾病的主要原因是食品及其原料的生物性污染和化学污染。大多数的食源性疾病是由病原生物引起。主要包括：本章将重点介绍检验检疫样品的采集，以及病原微生物的分离及鉴定方法了解常用的检验检疫技术，如免疫技术，PCR技术，核酸杂交技术等。第一节 检验检疫样品一、病料采集和运送 采集和运送不得当，影响病原菌的分离。 采集前了解不同病原菌在动物体的分布情况。 取样时应注意： 1.对疫病作初步诊断。 2.采样器械需提前灭菌，操作时应戴手套、口罩等，进行无菌操作。 不同材料灭菌方法煮沸消毒：沸水30min，用前酒精擦拭，火焰烧一下0.5%石碳酸水溶液煮沸10min高压湿热灭菌121 ℃，30min；或者是干热灭菌135-140℃灭菌3-5h；160-170℃灭菌2-4h；180-200℃灭菌0.5-1h3.解剖前检查 急性死亡动物解剖前先用显微镜查其血液抹片，检查是否有炭疽杆菌存在。 炭疽死亡的动物尸体不能解剖，因为： （1）炭疽是各种家畜、野生动物及人共患的一种传染病，人可经皮肤局部感染而造成死亡。 （2）病死畜体内及其排泄物常含有大量菌体，当尸体处理不当，形成大量有强大生命力的芽孢污染土壤、水源、牧地等则可成为长久的疫源地。 证明非炭疽杆菌后，采取有病变脏器或者组织送实验室，证明其病因。炭疽杆菌4.取材时间要早 为了避免微生物的污染，应尽早取样，尤其是动物内藏病变组织，应在患病牲畜死后立即进行，最好不超过6h。夏季要在动物死亡后2h内采取病料;剖开腹腔后,首先取材料,再作检查,因时间拖长后肠道和空气中的微生物都可能污染病料。已腐败变质的畜尸不能采取病料。作细菌学培养的则应采用未使用过治疗药物的病畜。5. 不同疫病的采样 不同样品的采集方法见下页表。6.脓、血液及黏液膜片的制作材料置玻片上玻棒均匀涂抹包扎注明号码，说明不同样品的采集方法检验检疫样品二、病料的保存病料采集后，若不能及时送检，需加入适量的保存剂，使病料新鲜。1.细菌材料的保存饱和NaCl溶液：蒸馏水100mL, NaCl 38-39g，溶解后，高压灭菌。30%甘油缓冲盐水溶液：纯中性甘油30mL、 NaCl 0.5g、碱性磷酸钠 1.0g、0.02%酚红1.5mL、中性蒸馏水100mL,溶解后灭菌。 检验检疫样品2. 病毒检验材料的保存50%甘油缓冲盐水溶液：纯中性甘油150mL、 NaCl 2.5g、酸性磷酸钠 0.46g、碱性磷酸钠 10.74g、 蒸馏水150mL, 溶解后灭菌。 鸡蛋生理盐水：鸡蛋表面消毒↓打蛋入灭菌容器↓加入总量十分之一的灭菌生理盐水混匀↓56-58℃,30min↓第二天和第三天重复加热检验检疫样品3. 病理组织学检验材料的保存4.寄生虫学检查材料 第一,血液寄生虫(如血孢子虫),需送检血片及全血。 第二,线虫(绝大部分在胃肠道,也有的在肺、肾等处)主要是挑拣虫体（要注明采集的部位）,尽可能多拣一些,并把它保存在4%福尔马林或70%的酒精中。10%福尔马林溶液： 40%甲醛溶液(10ml)+水(90ml)甘油和10%福尔马林溶液混合可用于在冬季保存组织块,以防组织块冻结.检验检疫样品三. 病料送检装病料的容器上要写明编号，附上病料详细记录和送检单。应注明所采家畜的品种、年龄、发病情况、死亡时间、流行病学特点、采集时间、采集地点、畜主、送检目的、病料名称、保存液等细资料。还应注明送检单位、地址、送检日期、送检者姓名及电话号码等。送检病料应按要求包装，如微生物检验材料怕热，应用水瓶冷藏包装。病理材料怕冻应放入保存液包装后送检等。 500g氯化铵加1500mL水可使瓶内水在0℃保持24h。检验检疫样品三. 病料送检涂片自然干燥,在玻片之间垫上半节火柴棒,避免磨擦,将最外的一张倒过来使涂面朝下,然后捆扎,用纸包好。装在试管、广口瓶或青霉素瓶内的病料，均需盖好盖,或塞好棉塞,然后用胶布粘好,再用蜡封固,放入保温箱中,盛病料的容器均应保持正立,切勿翻倒,每件标本都要写明标签。病料经包装装箱后，要尽快送到检验单位，最好派专人送去，长途最好空运。第二节 细菌分离与鉴定一、无菌技术 由于微生物在自然界分布非常广，因此细菌的分离培养必须在无菌条件下进行，以防止外界微生物的污染。 无菌操作场所在使用前需用紫外灯照射30-60min 操作台面使用前，70%酒精擦拭灭菌 所有需要用到的物品如平板、培养基等使用前灭菌 操作人员工作前清洗双手，然后用70%酒精消毒 灭菌的试管打开和关闭时需在火焰上通过一两次，以保持无菌 接种工具使用前后需火焰灭菌 分装培养基、倒平板、接种等操作需在无菌场所进行 从动物体内抽血或接种时，应先剪去局部毛，再进行常规消毒。 工作完毕，室内空气用紫外灯照射3