生物化学-第14章 RNA的生物合成－转录-CPL.ppt

RNA transcription Trp synthase complex 衰减子 Trp浓度低，repressor 不能结合操纵基因， 转录进行, Trp? Trp浓度高，通过衰减子 减弱转录, Trp? 衰减子(Attenuator): 位于结构基因起始密码子前，能够终止 和减弱转录作用，这段序列称为前导序列。 衰减作用(attenuation) 1984年Mizuno等发现一种与mRNA互补的RNA。 它与mRNA结合，阻断mRNA翻译，从而调节基因表达,　称为反义RNA，亦称为干扰mRNA的互补RNA（micRNA）。 （３）翻译水平的调节　　　　　——反义RNA的调节 反义RNA可能的机制 （1）I类和靶mRNA序列或/和SD序列形成双链，直接阻碍其翻译起始；或与靶mRNA结合形成双链RNA，从而易被RNA酶Ⅲ 降解 （2）II类在靶分子的部分区域形成双链区，改变其构象，直接影响其功能。 （3）Ⅲ类反义RNA则直接抑制靶mRNA的转录 核糖体结合位点 ATG上游8nt 反义RNA的应用 ? 具有高度的特异性，一种反义RNA抑制一种mRNA。 ? 可人工设计合成反义RNA，抑制靶基因的表达，从而达到治疗疾病的目的，即基因治疗。 如乙肝病毒、HIV等都是单链RNA病毒， 可利用反义RNA抑制其在体内的复制。 可用反义RNA抑制癌蛋白的表达。 3. 真核生物基因表达的调控 真核生物的基因结构复杂。 真核基因调控以利用激活物的正调控为主。 转录涉及一套转录因子（调控序列与基因调节蛋白）的参与。 真核染色体DNA处于转录抑制状态，组蛋白乙酰化，磷酸化，CpG的脱甲基使其转录去阻抑。 转录和翻译在时空上是分开的。 基因表达的各个调节部位 转录是基因表达控制的中心环节 转录控制 转录后 加工 转运 及定位 翻译调控 蛋白质 活性控制 mRNA的降解控制 转录水平的调节 转录水平的调节是真核生物基因表达调 节中最重要的环节。 主要通过顺式作用元件和反式作用因子 相互作用来完成。 顺式作用元件（Cis-acting element） 对基因表达有调节活性的DNA序列， 其活性只影响与其自身处在同一个DNA 分子上的基因，多位于基因旁侧或内含子 内，不编码蛋白质。 ① 启动子（promoter） ② 增强子（enhancer） ③ 静息子（silencer） 顺式作用元件主要有： 真核启动子 真核启动子一般包括转录起始点及其上游约100~200bp序列，包含有若干具有独立功能的元件，其元件可分为两种: 核心启动子元件 上游启动子元件 核心启动子元件： 指RNA聚合酶起始转录所必需的最小的DNA序列，包括转录起始点及其上游-25bp处的TATA盒。核心元件决定转录起始位点和产生基础水平的转录。 ? 包括通常位于-75bp附近的CAAT盒和GC盒、以及距转录起始点更远的上游元件。 ?这些元件与相应的蛋白因子结合能提高或改变转录效率。 ?不同基因具有不同的上游启动子元件，其位置也不相同。 上游启动子元件： 增强子（Enhancer) 是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，可远距离作用，通常1－4kb，个别情况30kb。 通常长100－200bp，基本核心组件长8－12bp, 需有启动子才能发挥作用。但对启动子没有严格的专一性。必须与特定的蛋白质结合后才能发挥增强转录的作用。 一般具有组织或细胞特异性，由这些细胞或组织中的特异性蛋白质因子所决定的。 反式作用因子（Trans acting factor） 能与顺式作用元件结合，调节基因转录效率的一组蛋白质，编码基因与作用的靶DNA序列不在同一DNA分子上。 反式作用因子的主要特点 A. 识别并结合DNA顺式作用元件的调控蛋白； B. 激活和阻遏基因的表达； C. 通过与RNA聚合酶结合或其它反式因子共 同作用。 螺旋-环-螺旋（helix-loop-helix） 螺旋-转角-螺旋（Helix-turn-helix） 亮氨酸拉链（leucine zipper） 锌指（zinc finger）结构 反式作用因子的特征性结构 ??? 锌以四个配位键与肽链的Cys或His残基结合，指形突起的肽段含12-13个氨基酸残基，嵌入DNA的大沟中，由指形突起或其附近的某些氨基酸侧链与DNA的碱基结合而实现