动物分子生物学第3章(2) 转录.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * RNA合成与DNA复制的异同点 相同点： 都以DNA链为模板； 合成的方向均为5’---3’方向； 聚合反应均是通过核苷酸之间形成的3’,5’-磷酸二酯键，使核苷酸链延长。 不同点： 本节重点内容 原核生物和真核生物启动子与终止子的基本结构、RNA聚合酶的基本特点； 转录的不对称性； 原核生物转录的起始与终止； 真核生物mRNA转录后的加工。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 真核生物有3种RNA聚合酶，所以有3种启动子 （1）RNA聚合酶I的启动子：只有1种 负责转录rRNA，由两部分序列组成： 核心启动子：-40 ~ +20,可单独起始转录 上游调控元件（upstream control element）：-170 ~ -107，可增强转录效率 2. 真核生物基因转录的启动子 （2）RNA聚合酶II的启动子：结构复杂 主要转录mRNA，核心启动子主要包括： Cap site(帽子位点)： 转录起始位点（+1），其碱基大多为A，在该位点周围具有一段保守序列,类似原核生物，是RNA聚合酶识别位点； TATA框（又称Hogness框）： －25~ -30位，RNA聚合酶结合位点，控制转录起始位点。保守序列：rich GC----T82A97T93A85A63(T37)A83A50(T37)----- rich GC； CAAT框(－75位)和GC岛(C不甲基化) 控制转录效率, 共同序列：GCGC----GGC(T)CAATCT--- 真核生物Ⅱ型核心启动子的结构 除了核心启动子外，真核生物Ⅱ型启动子还包括 上游调控元件（upstream element，UPE ）： 增强子（enhancer） 又称远上游序列, －100位以外，增强转录效率。必须由两个紧密相连，具有间距效应的增强子元（与激活蛋白结合）组成 （3）RNA聚合酶III的启动子：组成较复杂 负责转录5S rRNA、tRNA和某些核内小分子RNA（snRNA）。 又可被分为三个亚类。5S rRNA和tRNA基因的启动子是内部启动子（internal promoter），位于转录起始位点的下游，都由两部分组成。第三类启动子由三个部分组成，位于转录起始位点上游。 3. 真核生物转录的起始 （1）RNA聚合酶Ⅱ的转录起始复合体 真核生物的RNA聚合酶不能单独起始转录，需要许多蛋白质的帮助才能识别启动子并起始转录，这类蛋白中有一些称为普通转录因子（transcription factor, TF），包括TFⅡA, TFⅡB, TFⅡD, TFⅡE, TFⅡF, TFⅡH等。 TFⅡD ：含有与TATA框结合的蛋白质TBP （TATA binding protein）和一组TBP相关因子TAF （TBP associated factor） 复合体形成的具体步骤： TBP 和TFⅡA 识别并结合在启动子的TATA框上，形成聚集中心; D、B、F、聚合酶Ⅱ、E和H依次结合在启动子上，形成起始复合体; 转录开始后，E, H, B, D, A 从转录起始复合体上解离下来，转录进入延伸阶段。 TFⅡA TBP 转录起始 （2）RNA聚合酶Ⅰ的转录起始复合体 需要2种转录辅助因子，包括: 上游结合因子（upstream binding factor, UBF）:以一种序列特异性方式结合到核心启动子和上游转录控制元件的相关序列上; 选择因子1（selective factor 1, SL1）:当UBF结合到启动子以后，SL1 能与启动子结合并进一步与UBF相互作用。 当这两种辅助因子结合以后， RNA聚合酶Ⅰ就与核心启动子结合并起始转录 （3）RNA聚合酶Ⅲ的转录起始复合体 需要3种转录辅助因子，包括: TFⅢB ：由TBP和另外两种蛋白质组成，使聚合酶Ⅲ 准确结合到转录起点，是转录起始因子。 TFⅢA：一种锌指蛋白。 TFⅢC: 大蛋白质复合体。 A和C是组装因子，帮助B结合到正确位置上。当这3种辅助因子结合在启动子以后， RNA聚合酶Ⅲ 就与核心启动子结合并起始转录 三、转录后的加工 前体RNA的加工(真核生物) 5′端加帽（ 5’-capping ) 帽子结构：是一个7’-甲基鸟苷酸以5’-5’方式连接到mRNA 5’端形成的。 Pre mRNA Mature mRNA Cap0：末端G（额外添加的核苷酸）的第7位甲基化(m7G)，发生在所有真核生物中； Cap1：除Cap0外，在次末端（第2位,初始转录本的第1