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实验七 动物试验法 一、实验目的： 微生物实验室中常用的试验动物有家兔、豚鼠、小白鼠、鸽子、鸡等。本实验的目的在于学习实验动物的接种，采血以及剖检的方法。 By law, an institutional committee must review all aspects of the animal care and use program. IACUC Basic Functions： 1.Reviewing and approving animal use protocols submitted by investigators. 2. Monitoring the animal care and use program by conducting thorough reviews of the program and inspections of the animal facilities semiannually. IACUC 二、实验器材： 1. 实验动物：小白鼠16只, 家兔1只； 2. 接种病料：多杀性巴氏杆菌菌液； 3. 10ml或20ml灭菌注射器1支， 1ml灭菌注射器6支和2个灭菌的12#或16#长针头(1.5寸)，酒精棉球若干； 4. 蜡盘(1个/组)，眼科镊，眼科剪（1套/组）； 5. 消毒水； 6. 显微镜，酒精灯，接种环，革兰氏染色液，瑞氏染色液，干净的玻片（2块/人）等。 三、实验内容： （一）实验动物接种法 （二）实验动物采血法 （三）小白鼠的剖检 （四）感染多杀性巴氏杆菌小白鼠新鲜病料涂片瑞氏染色镜检 三、实验内容： （一）实验动物接种法 重点介绍小白鼠皮下接种法。 3 1 2 三、实验内容： （二）实验动物采血法 小白鼠的采血法 鸡的采血法 家兔采血法 家兔采血法 ： ① 耳静脉 ② 心脏 ③ 颈动脉放血 心脏采血的操作要点：将家兔以绳索将四肢固定，呈仰卧保定，术者在动物左前肢腋下处剪毛及局部消毒，在胸部心脏跳动最明显处下针。将针头直刺深入至心脏，感到针头跳动或有血液向针管内流入时，即可抽吸，一次可采血15-20毫升。 三、实验内容： （三）小白鼠的剖检 1．先用肉眼观察动物体表的情况，并留心观察接种部有无变化。 2．将小白鼠尸体用3%来苏儿液浸泡1-3分钟。 3．将小白鼠尸体仰卧固定于蜡盘上，充分露出胸腹部。 4．以无菌剪刀自其颈部至耻骨部切开皮肤，并将四肢腋窝处皮肤剪开，剥离胸腹部皮肤使其尽量翻向外侧。 三、实验内容： （三）小白鼠的剖检 5．再用灭菌剪刀剪开腹腔，观察肝、脾及肠系膜淋巴结等有无变化。 6．可采取肝、脾（断面）、心血等直接涂片染色镜检。 7．将小白鼠尸体浸泡于3%来苏儿液中杀菌，最后再埋于深坑中，令其自然腐化。 三、实验内容： （四）感染多杀性巴氏杆菌小白鼠新鲜病料涂片瑞氏染色镜检 瑞氏染色法：抹片自然干燥后滴加瑞氏染色液于其上(为了避免变干，染色液可稍多加些)，经1-3分钟，再加约与染液等量的蒸馏水，轻轻显动玻片，使与染液混匀，经5分钟左右，直接用水冲洗，吸干或烘干，镜检。 细菌染色成蓝色，呈典型的两极着色，组织、细胞等物呈其它颜色。 实验报告 简述家兔心脏无菌采血的主要操作步骤。 2. 简述接种多杀性巴氏杆菌的小白鼠剖检方法。 3. 绘制感染多杀性巴氏杆菌小白鼠新鲜病料涂片瑞氏染色镜检图。