临床色谱质谱检验技—第五章液相色谱-质谱技术（三）.pdf

《临床色谱质谱检验技术》 第五章 液相色谱-质谱技术 临床基因组教研室 佘旭辉 lab-shexuhui@ 2018.04.03 目 录 Contents 一、复习 二、液相色谱-质谱方法的建立 （2 ） 三、小结与思考 《临床色谱质谱检验技术》 复习 复习 Ü质谱方法的建立 （离子源、质量分析器、 扫描方式、参数 优化 ） 液相色谱仪的构造 Ü 五个基本组成系统 ：高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和 数据处理系统。 《临床色谱质谱检验技术》 二、液相色谱-质谱方法的建立 （2 ） 液相色谱方法的建立 Ü 色谱柱的选择 Ü 流动相的选择 Ü 洗脱方式的选择 Ü 内标的选择 Ü 基质效应的考察 液相色谱方法建立— 目标及要求 Ü 目标 Ü 开发出分离效果好、稳定性高、分析时间短的液相方法 R=0.75 号 信 R=1.0 基本分开 应 响 R≥1.5 完全分离 保留时间 t, min 液相色谱方法建立— 目标及要求 Ü 要求 Ü 选择合适的液相模式 ； Ü 选择合适的色谱柱 ，要求柱效高、寿命长 （多厂家、备选 ）； Ü 优化洗脱条件 ，预留冲洗和平衡时间得到稳定的条件 ； Ü 条件允许的情况下尽可能地获取好的色谱分离 （分离度大于1.5 ）； Ü 尽量选用梯度洗脱模式 液相色谱方法建立—色谱柱的选择 物理参数 取决于分离 目的 化学参数 • 柱长*内径 ：快速分析 ？ 取决于样品性质 所有组分分离 ？ • 粒径 ：分析 ？制备 ？ • 基质 ：高纯硅胶 ； • 孔径 ：小分子化合物 ？大 分子化合物分析 ？ • 键合相 ：了解化合物性质 ， 如极性、酸碱性、溶解性等 ； • 比表面积 ：并不是比表面 积大或者小就更好 ，选择 • 硅胶表面性质 ：使用低pH 适合 目的的比表面积。 值 ，以减少硅醇基的作用 ； • 碳载量 ：通常影响选择性 ； • 封端 ：对碱性化合物 ，选择 高封端的色谱柱。 液相色谱方法建立—色谱柱 Ü 色谱柱的选择 柱类型