临床生化检验—线性实验（2015）.ppt

方法学评价实验安排 序号 综合实验内容 结果汇报及解释 方法学评价实验 室内质量控制实验 室间质量评价实验 准备 试剂、样本准备 质控物分装、冷藏 学生编号保存 质控物收集 实验前发放 1 重复性实验 2 回收试验 制作L-J质控图表 2个浓度质控物*2 讨论组（1/7） 3 干扰试验 2个浓度质控物*2 5个浓度质控物*1 讨论组（2/8） 4 线性试验 2个浓度质控物*2 讨论组（3/9） 5 检测能力试验 2个浓度质控物*2 5个浓度质控物*1 讨论组（4/10） 汇总 讨论 方法学评价论文 室内质控分析报告 室间质评分析报告 讨论组（5/11） 主讲：余琳 线性范围试验 学习目的 掌握：线性范围实验的原理和意义 熟悉：线性范围试验的操作过程。 了解：线性范围试验的临床应用价值。 线性范围试验的原理 使用不同浓度的葡萄糖标准溶液，用GOD-POD法试剂测定各自的浓度，以标准预期浓度为横坐标，实际测得的浓度为纵坐标，在方格纸上作图，即可绘制出一条直线，即计量反应曲线，根据建立的直线方程进行线性范围的评价。 一般测定方法的线性范围要求能覆盖临床上的参考值和常见疾病的医学决定水平，以减少标本稀释重测的机会。 实验用试剂 1．40mmol/L葡萄糖标准溶液 。 2．其它试剂 同血糖测定评价方法(GOD- POD)。 S：R＝1：150 37。C 10min 波长＝505nm  标准管 加入物 0 1 2 3 4 5 葡萄糖标准液 （ul） 0 2 4 6 8 10 蒸馏水 （ul） 20 18 16 14 12 10 GOD-POD试剂 （ml） 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 线性范围试验操作步骤 线性范围试验操作步骤 测定工作曲线的浓度点以5点为宜，浓度梯度的间隔要一致。 以葡萄糖浓度预测值为横坐标，测定值为纵坐标，将其交点在方格纸上标出并绘制散点图，若呈直线趋势，则可拟合直线回归方程。 此曲线除了标准浓度过高部分发生弯曲外，其余大部分都呈直线，即选取此直线段浓度范围作为该方法的分析范围。 线性范围的确定及其评价 1）求回归方程的回归系数和截矩。 2）写出回归方程 y=a+bx，画出回归直线。 3）对回归方程进行检验。 4）临床实用性验证。 (1) 求出此直线的截距a和斜率b，建立直线回归方程 y=a+bx； （2）描绘回归直线 根据以上求得回归方程y=a+bx 可以在自变量X的实测范围内任取X1和X2两值代入上式求得P1（X1，Y1）和P2（X2，Y2）两坐标点，将两点连结为一直线，就属该方程的回归直线。作图要注意的是P1、P2两点最好距离远些，绘出的直线在坐标上误差就小些。 (3) 线性回归方程的检验： 建立的回归方程 y=a+bx ,其中a接近于0，b在0.95~1.05之间时的实际测定的范围为该方法的线性范围。 (4) 临床实用性验证： 使用高浓度和低浓度临床标本若干份进行实际的线性检查，理想的情况是该方法的分析范围的最高浓度上限应能使95%的临床标本不经稀释均能得到正确的测定结果。 注意事项 1．葡葡糖标准液的加量必须十分准确。 2.以葡萄糖理论浓度为横坐标，测定值为纵坐标，而不能以葡萄糖理论浓度和对应的吸光度值作图。 【思考题】 线性范围变窄的原因有哪些？ * *