分子生物学实验复习题附答案.docxVIP

1 ． 核 酸 1 ． 核 酸 分 子 大 小 与 琼 脂 糖 浓 度 的 关 系 （ 2 ） 琼 脂 脂 糖 的 浓 度 不 同 大 小 的 DNA 需要 用 不 同 浓 度 的 琼 脂 糖 凝 胶 进 行 电 泳 分 离 。 琼 脂 糖 浓 度 与 DNA 分离 范 围 琼 脂 糖 浓 度 /% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 DNA 分子在 pH 值高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向阳极移动。DNA 分子在电场中通过琼 脂糖凝胶而泳动，除了电荷效应以外，还有分子筛效应。由于 DNA 分子可片段的相对分子质量不同， 移动速度也不同，所以可将相对分子质量不同或构象不同的 DNA 分离。DNA 片 段 迁 移 距 离 （ 迁 移 率 ） 与 碱 基 对 的 对 数 成 反 比 ， 因 此 通 过 已 知 大 小 的 标 准 物 移 动 的 距 离 与 未 知 片 段 的 移 动 距 离 时 行 比 较 ， 此 时 电 泳 的 迁 移 率 不 再 依 赖 于 分 子 大 小 ， 因 此 ， 就 用 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 分 离 DNA 时 ， 分 子 大 小 不 宜 超 过 此 值 。 分子生物学复习题 实验一 DNA 的制备 （1）为什么分子生物学实施时要担心 EB？ 溴化乙锭（Ethidium bromide）是 DNA 诱变剂，溴 化 乙 锭 可 以 嵌 入 碱 基 分 子 中 ， 导 致 错 配 。 具 有 高 致 癌 性 ( 接 触 致 癌 ) （2）DNA 加样缓冲液的用途是什么？ 由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对 DNA 的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需 加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。 （3）DNA 电泳时所用的琼脂糖凝胶其浓度是如何决定的？ 线 状 DNA 大 小 /kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1 （4）琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 的原理是什么 便 可 测 出 未 知 片 段 的 大 小 。 但 是 当 DNA 分 子 大 小 超 过 20kb 时 ， 普 通 琼 脂 糖 凝 胶 就 很 难 将 它 们 分 开 。 （5）琼脂糖凝胶电泳时胶中 DNA 是靠什么发出荧光的？为什么？ 溴 化 乙 锭是 一 种 高 度 灵 敏 的 荧 光 染 色 剂 , 可插入 DNA 双螺旋结构的两个碱基之间，形成一种荧光络合 物。在 254nm 波长紫外光照射下，呈现橙黄色的荧光。用溴化乙啶检测 DNA，可检出 10-9g 以上的 DNA 含量。 （6）制备基因组 DNA 时用到的以下试剂分别起什么作用？ CTAB 等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使 DNA 得以游离出来 氯仿有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可 从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。 无水乙醇上清液中加入无水乙醇使 DNA 沉淀，沉淀 DNA 溶于 TE 溶液中，即得植物总 DNA 溶液。 75%乙醇,乙醇轻轻洗涤管壁 实验二 RNA 的制备 1.制备 RNA 时通常要注意些什么？为什么？ 应该要注意(1)不要徒手操作,必须带手套;(2)加样时不能够大声说话,防止唾液等进入; 由于 RNA 分子的结构特点，容易受 RNA 酶的攻击反应而降解，加上 RNA 酶极为稳定且广泛存在，因而 在提取过程中要严格防止 RNA 酶的污染，并设法抑制其活性，这是本实验成败的关键。 2.制备的 RNA 通常有哪些用途？制备的 DNA 通常又有哪些用途？ 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化 RNA。 质粒 DNA 构建克隆载体,分离目的基因 3.RNA 制备好后是通过什么方法检测其有没有降解的？从胶上检测什么指标来判断 RNA 质量好坏？ 为什么？ 1.2%琼脂糖凝胶电泳。在紫外检测仪下观察，完整的总 RNA 样品应呈现三条带：28S、18S、和 5S rRNA。其中 28S rRNA 条带的亮度应该为 18SrRNA 条带的 1.5~2 倍。反之，说明部分 28S rRNA 已经 降解成 18S rRNA。若无清晰条带，则说明样品 RNA 已严重降解。若加样孔内或孔附近有荧光区带， 则说明有 DNA 污染。 4.RNA 制备好后通过什么方法测定其含量？ RNA 通常用分光光度计测量，通常在 A260 的读书在 0.15-1.0 之间才是可靠的，A260 为 1 相当于 RNA 的浓度为 40 微克/ml 实验三 质粒 DNA 的制备 1.什么是质粒？质粒有什么主要用途？ 染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链 DNA 分子（c