光谱分析法PPT课件2.pptx

光谱分析法; ;1. 紫外可见分光光度法用于体内药物分析的特点： 优点： 简单、快速 缺点：专属性差、灵敏度低（10-7g/mL）;2. UV－Vis法原理和影响分析的因素;谱带宽度、溶液的pH、被测物在溶剂中发生缔合、 解离或溶剂化等因素均可使直线偏离，在测定过程中都会产生误差，均需引起注意。;3. 体内药物UV－Vis分析法的建立;;（2）专属性较差;例1 差示分光光度法测定血浆中的水杨酸;∵ ANaHCO3＝A水杨酸＋A杂质 A H2SO4＝A水杨酸′＋A杂质′ 且 A杂质＝ A杂质′ ∴ ΔA＝ A H2SO4 -A NaHCO3 ∝ C水杨酸 可用于测定水杨酸血药浓度;标准曲线的制备;血药浓度测定 ;例2 兔血清中氨茶碱的双波长分光光度法测定 ;原理：; △A与茶碱浓度有良好线性关系。空白血清不存在干扰，每次测定时无需用空白血清校正，这样在治疗监测中，避免了取空白血清的麻烦。;血清样品的制备 ;标准曲线的制备;血药浓度测定;例3 导数分光光度法;二、荧光分析法（Fluoromertry）;特点： * 灵敏度高（10-10~10-12g/mL） 灵敏度高，易受干扰，须做空白 * 选择性好 * 稀溶液中浓度与荧光强度成正比 ; 只有在很稀的溶液中，即当ECl ≤ 0.05时，荧光强度与被测物浓度间的关系才成正比关系：;（二）影响荧光强度的因素;外因: 1. 温度 温度↑→ 荧光↓ 2. 溶剂 极性↑→荧光↑，粘度↓→荧光↓ 3. pH 主要影响弱酸、弱碱物质 4. 荧光猝灭剂 如卤素离子、重金属离子等 5. 激发光会造成荧光物质分解，快速测定 6. 散射光波长与荧光波长接近，对测定有干扰;（三）方法与应用 ;标准曲线的制备 取诺氟沙星标准溶液（200μg/ml）1、2、5、10、20、30、40μl，分别加入健康人血清1.0ml，摇匀，加10％三氯醋酸3.0ml，在液体快速混合器上振荡1min，离心（3000r/min）5min。取上清液3.0ml，加1mol/LNaOH1.32ml，pH4.5醋酸－醋酸钠缓冲液0.5ml，摇匀，测定荧光强度，同时取空白血清同法操作做空白校正，经回归分析得线性方程。线性范围0.2～8μg/ml;血药浓度测定 取血清1.0ml，加10％三氯醋酸3.0ml，在液体快速混合器上振荡1min，离心（3000r/min）5min。取上清液3.0ml，加1mol/LNaOH1.32ml，pH4.5醋酸－醋酸钠缓冲液0.5ml，摇匀，测荧光强度，同时以标准管对照，计算血药浓度。 ;2. 间接测定法 化学引导荧光法  利用化学方法可以使一些本身不能产生荧光的化合物转变成荧光化合物，并且改善了方法的选择性。 反应机理：改变了分子结构，增加了π电子共轭系统的长度或增加了分子结构的刚性和共平面性，从而增加了荧光强度。;常用的化学处理方法主要有下面几类： 1. 氧化还原反应 例1 吗啡在弱碱性条件下可被铁氰化钾氧化成比其本身荧光强得多的二聚物伪吗啡。 测定体内吗啡含量，可将提取纯化后的水溶液调节pH至8.5，加 入K3Fe(CN)6使其反应，测定反应液的荧光强度（λex 350nm， λem 440nm），线性范围0.1－8.0μg/ml。; ; ;例5 苯骈噻嗪类药物经过氧化氢、高锰酸钾等 氧化剂作用可生成亚砜结构，具有强荧光，可用 于测定体液中微量药物。 λex 340nm，λem 380nm。;2. 水解反应 例1 氨苄青霉素在pH2的缓冲液中，以甲醛为催化剂，90℃加热2小时，水解生成具有强烈黄色荧光的化合物。经溶剂萃取，再转溶于1mol/L NaOH溶液中，测定荧光强度（λex 346nm，λem 422nm）。生成的荧光产物可能是哌嗪二酮衍生物。;3. 缩合反应例1 血清中异烟肼的测定，可利用其在醋酸酸性溶液中与水杨醛缩合成腙，经巯基乙醇还原后有强烈荧光。 λex 392nm，λem 478nm， 最低检出浓度：0.01μg/ml;例2 色胺和5－羟色胺与甲醛缩合，生成的化合物，经氧化后生成一个发强荧光的 “norh