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-4 -4 -5 分析化学电子讲义 比色及吸光光度法 比色及吸光光度法 教学目的： 掌握比色分析法的特点、方法原理，应用范围和一些专业术语。 明确溶液颜色与光吸收的关系。 掌握朗伯-比耳定律的物理意义及其应用。 教学重点：朗伯-比耳定律 教学内容： 第一节 概述 一、比色分析法 比色分析法：利用比较溶液颜色深浅的方法来确定溶液中有色物质的含量。 有色物质溶液颜色越深，浓度越大；颜色越浅，浓度越小。 二、比色分析法测定步骤 选择适当显色剂，使被测组分转变成有色物质，称为显色阶段。测定无 色溶液时要进行显色阶段。 选择最佳条件测定溶液的深浅度，称为比色阶段。 三、发展过程： 目视比色法 → 光电比色法 → 分光光度计（吸光光度法） 四、比色与分光光度法的特点 比色和分光光度法主要用于测定微量组分。 灵敏度高：测定试样中微量组分（1～0.001%）常用方法，甚至可测定 10 ~ 10 %的痕量组分。 准确度高：一般比色法相对误差为 5～10%，分光光度法为 2～5%，其 准确度虽比重量法和滴定法低，但对微量组分的测定已完全满足要求。如采用 Analytical chemistry 10-34 10 -34 分析化学电子讲义 精密分光度计，误差将减少至 1～2%。 比色及吸光光度法 应用广泛：几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地 用比色法和分光光度法进行测定。 操作简便、快速，仪器设备也不复杂。 例如：试样中含 Cu 量为 0.001%，即在 100mg 试样中含 Cu 0.001mg，用比 色法可以测出。 如用碘量法进行滴定分析测定：设 Na  2  S  2  O  3  溶液浓度为 0.05mol/L，消耗体 积为 V（mL），则： 0.001/63.55 = 0.05·V V = 0.0003（mL） 所需 Na  2 S  2 O  3 标准溶液 0.0003mL，无法用化学分析法来测定，但比色和吸 光光度法完全可以准确的测定其含量。 第二节 光的基本性质： 光具有两象性：波动性和粒子性 1、波动性：入 ν = c 入：波长（nm）  ν：频率（Hz）  c：速度（3×10 cm/s） 例如：光的反射、折射、衍射、偏振、干涉等现象。 2、粒子性：E = h ν E：光量子能量  h：常数（普朗克常数=6.6256×10 J·s）  ν：频率 不同波长（或频率）的光，其能量不同。 入大 — E 小；E 大—入小 。 第三节 溶液颜色与光吸收的关系 一、光谱的分类 可见光：混和光，由波长 400～760nm 的电磁波按适当强度比例混合而成， 因人们视觉可觉查到，故称为可见光。 Analytical chemistry 分析化学电子讲义 紫外光：电磁波的波长小于 400nm。 红外光：电磁波的波长大于 760nm。 各种单色光的波长 日 光 比色及吸光光度法 紫外线  可见光  红外线 无色  紫  蓝  青  蓝  绿  黄绿  黄  橙  红  无色 400-450 450-480 480-490 490-500 500-560 560-580 580-600 600-650 650-760 400nm  760 1、互补色：当将某两种颜色的光按适当强度比例混合时，可以形成白光， 这两种色光就称为互补色光。 绿 黄 580-600 橙 600-650 红 650-750 500-580 白光 紫 400-450 青 490-500 青蓝 480-490 蓝 450-480 光色互补示意图 溶液所以呈现不同的颜色是由于该溶液对光具有选择性吸收。例如： ① 当入射光（白光）全部透过溶液时——溶液无色透明。 Analytical chemistry 3412-5-5-5-5 3 4 1 2 -5 -5 -5 -5 分析化学电子讲义 ② 当入射光（白光）全部被溶液吸收时——溶液黑色。 比色及吸光光度法 ③ 当入射光（白光）通过 KMnO  4  溶液时，该溶液选择性吸收绿色波长的 光，而将其它的色光两两互补成白光而通过去，只剩下紫红色，未被互补，所 以 KMnO 4 呈现紫色。 例如：K  2  CrO  4  吸收蓝色光  溶液呈黄色 2、吸收曲线：将不同波长的光依次通过一定浓度的有色溶液，分别测出它 们对各种波长光的吸收程度，用吸光度 A，或光密度 D 和消光度 E 表示。然后 以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，画出曲线，所得曲线称为光的吸收曲线 （吸收光谱），如下图所示。 KMnO4 溶液吸收曲线 1--c(KMnO  4  )=2×10 mol/L；2—c(KMnO  4  )=4×10 mol/L； 3—c(K