第六章 胚胎培养和离体受粉.pptVIP

For culture of mature endosperm, fruits are surface sterilized and endosperm plus embryo are dissected out under aseptic conditions. For culture of immature endosperm, entireseeds are sterilized and the endosperm tissue is carefully excised under aseptic conditions using a stereoscopic microscope. It is desirable to dissecting out endosperm explants free of embryo tissue. Failure in this regard couldlead to contamination of the endosperm calluswith the tissue of embryo origin (diploid tissue). 离体开花（in vitro flowering） Physiology of flower In vitro pollination for breeding purpose 思考题 胚和胚乳培养的意义及方法 胚和胚培养注意事项 * 第六章 胚胎培养和离体授粉 胚培养 胚乳培养 胚珠和子房培养 离体授粉 一、胚培养 1、意义（5） 促使发育不良或中途败育的胚发育成熟 打破休眠期促进胚萌发 克服多胚品种珠心胚的干扰 快速繁殖良种砧木 诱导胚性愈伤组织 2、离体胚培养的发育途径 按正常胚胎发育途径形成植株 脱分化形成愈伤组织 胚“早熟萌发” 成熟胚 未成熟胚 维持胚的生长，进行正常的胚胎发育成熟，完成胚胎发育的全过程。 正常发育形成小苗 2.1 按正常胚胎发育途径形成植株 2.2 脱分化形成愈伤组织 离体胚 小植株 愈伤组织 激素浓度高 胚状体或不定芽 分化培养基 2.3 胚“早熟萌发” 畸形苗 发育不正常而死 未成熟幼胚 分离变异体 3、成熟胚的培养 3-1、材料的消毒与接种 通常来自成年健康、品种优良的母树或杂交种子 3-2、培养基 谷氨酰胺作为氮源，可以促进胚生长 LH、ME和YE促进胚生长 硫氨素促进胚根的伸长 生长素低浓度促进胚的发育（胚根） 赤霉素促进有后熟作用的种子萌发 3-3、培养条件 12小时光照和25?C，热带兰花杂交种胚30 ?C 附加成分 4、原胚的培养 无机氮： 渗透压： 复杂的天然提取物： 活性炭： 硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐； 蔗糖，8%-10%，不同发育期，渗透压不一样，初期高（WHY） 椰乳 吸附有毒物质 二、胚乳培养 1、用途 胚乳培养再生植株证明了全能性理论； 研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能； 再生植株多为三倍体，产生无籽果实； 研究育种和性状遗传。 柑桔、苹果、枇杷、枣、梨、桃、猕猴桃、马铃薯 2、胚乳培养 胚乳 胚状体发育成苗 不定芽苗 柑桔和枣 苹果和枇杷 愈伤组织 形态发生 三、胚珠和子房培养 1、作用 促进原胚继续生长，使幼胚发育成熟； 成功：四季桔、柑、凤仙花、洋葱 成功的植物：西葫芦、莴苣、百合等 未授粉胚珠和子房，诱导孤雌生殖，产生雌性单倍体 2、外植体消毒和接种 3、培养基及培养条件 4、离体培养胚胎的发育 胚珠或授粉子房培养，合子胚可以更好地发育成植株。但如果条件不适，也容易从幼胚或珠心组织产生愈伤组织。 芸香科易产生珠心胚。培养胚珠，获得大量珠心胚，用以品种复壮、快速繁殖和获得无病毒苗。同时，通过珠心组织培养，产生胚性愈伤组织，建立胚性组织培养实验体系。 四、离体授粉（In vitro pollination） 也叫离体受精（In vitro fertilizationi）、试管受精（Test-tube fertilization） 就是把未授粉的胚珠或子房从母体上切离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌的花粉，使之在试管内实现受精。可以克服自亲不亲和，从而得到远缘杂种。 取即将开花的花蕾，灭菌，切离子房，引入花粉 1-1、直接引入法 刀片在子房壁或子房顶端切开一个切口，把花粉配成花粉悬浮液滴于切口处 1-2、注射法 Short day plants:Plumbago indica 全书 内容 *