纸层析法分离氨基酸.pptxVIP

纸层析法分离氨基酸 ;实验目的 ;实验原理 ;分配层析 ;二、纸层析 ;溶质在滤纸上移动的速率可用Rf值表示： Rf= X/ Y 式中X：溶质斑点中心的移动距离 Y：溶剂前沿移动的距离 Rf值决定于分配系数。;(二) 影响Rf值的主要因素 ;3.层析所用的溶剂 同一物质在不同的溶剂系统中进行层析时，Rf值不同。所以溶剂的配制和使用必须严格，才能使Rf值的重现性好。在好的溶剂系统中被分离物质的Rf值应在0.05-0.85之间，样品中被分离组分的Rf之差最好大于0.05。 溶剂系统中的试剂若纯度不够，需经过预处理后才能使用。处理的方法因溶剂的性质而异。常用的处理方法有：酸、碱抽提，水洗涤，重蒸馏，脱水干燥等;4.pH值 溶剂和样品的pH值会影响物质的解离，从而影响物质的极性和溶解度，使Rf值改变。溶剂的酸碱度增大则流动相的含水量增高，使极性物质的Rf值增加；反之则降低。 为了避免或减少pH值对Rf值的影响，可将滤纸和溶剂用缓冲溶液处理，使之保持一定的pH值。 5.温度 温度能影响物质在两相中的溶解度，即影响分配系数；也影响滤纸纤维的水合作用，即影响固定相的体积.所以温度的改变使Rf值变化很大，为此，层析必须在恒温条件下进行。 ;6.展开方式 同一物质在其他层析条件完全相同的情况下，用不同的展开方式进行层