生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定.docVIP

实验三 生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 一、教学目的 初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 二、注意事项 1、实验材料的选择： （1）可溶性还原糖的鉴定：生物组织中的糖类有还原糖和非还原糖两类。常见的还原糖有葡萄糖、果糖和麦芽糖；蔗糖（甘蔗茎、甜菜的块根等）、淀粉（马铃薯、番薯的块茎等）是非还原糖。在双子叶植物中，光合作用的主要产物葡萄糖形成后，合成为淀粉暂时储存在叶子内，因此最好不用双子叶的叶子作为实验的材料。有些单子叶植物，如韭菜，叶子内虽然含有大量的可溶性还原糖，但由于叶片中叶绿素颜色较深，对于鉴定时的颜色反应起着遮盖作用，导致实验现象不明显，一般也不选用。本实验最理想的实验材料是还原糖含量较高的植物组织，而且要求组织的颜色较浅或近于白色，如苹果和犁的果实，也可以用白色的甘蓝叶、白萝卜替代。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为：苹果、梨、白色甘蓝叶和白萝卜。 （2）脂肪的鉴定：所用材料要求一脂肪含量高，二有一定大小做徒手切片，花生种子符合本实验的要求。实验前要将花生种子浸泡3~4h，有利于切成薄片，但浸泡时间也不宜过长，否则组织太软，切下的薄片不易成形。 （3）蛋白质的鉴定：适宜材料有豆浆、鸡蛋清。若用鸡蛋清，必须按要求稀释，否则影响实验效果，而且实验后易粘住试管壁不易洗刷 2、试剂的选用及注意事项： （1）可溶性还原糖鉴定过程中，因斐林试剂很不稳定，故应将组成试剂的两种溶液分别配制，使用是再加以混合，即现配现用。切不要将甲液和乙液分别加入组织样液中。实际上这个反应利用的是斐林试剂中的氢氧化铜作为弱氧化剂参与还原糖的反应，而氢氧化铜放置过久沉淀过多则不利于反应。 在水浴加热时，试管底部不要触及烧杯底，以防止试管受热不均匀而爆裂；并注意试管口也不要朝向自己或他人，防止沸腾的溶液冲出试管造成烫伤。另外，加入的斐林试剂不要太多，反而会使实验效果不理想。 （2）脂肪鉴定实验键是能否切出符合要求的薄切片，太厚光线不能通过。 （3）蛋白质的鉴定实验中，使用双缩脲试剂时，应先加试剂A（NaOH），造成碱性环境后再加入试剂B（CuSO4）（注意和使用斐林试剂的区别）。另外试剂B不能太多，否则硫酸铜的蓝色将遮盖颜色反应的真实效果。 3、斐林试剂与双缩脲试剂的区别： （1）溶液浓度不同（课本） （2）使用原理不同 斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液，它在加热的条件下与醛基反应，被还原成砖红色的Cu2O沉淀，可用于鉴定还原糖的存在，实验中溶液颜色的变化过程为：浅蓝色----棕色-----砖红色 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应的实质是在碱性条件下，Cu2+与双缩脲发生的紫色反应。而蛋白质分子中有很多与双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲发生颜色反应，可以使用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。 （3）使用方法不同：见课本，注意NaOH和CuSO4的使用先后顺序。