植物组培实验报告.pdfVIP

植物组织培养实验报告 实验名称： 葡萄柚的扩繁组织培养 学 院： 园林学院 专 业： 2012 级园林 小组成员： 指导老师： 实验日期： 2014.9.1—2014.10.14 实验一：葡萄柚扩繁培养基的制备（1L) 实验时间：9 月 1 日 实验地点:西南林业大学六楼实验室 实验步骤： 1．量取液体。大量元素 100 ml （用 100 ml 的量筒量），微量元素、有机元素、 铁盐均 10 ml （用 10ml 的量筒量），将上述量取的溶液混合于 1L 大烧杯中。 2.加纯水至 500-600 ml 刻度线稀释。 3.称取蔗糖 30 g ，用玻璃棒搅拌至溶解。 4.定容。用 1000 ml 量杯定容后转移至大烧杯 5.用移液枪取 6-BA100 μml,IBA 40 μml 。 6.混匀，调 PH 至 5.9 。 7.称取琼脂7g 于塑料盆内。将调好PH 的培养基倒入塑料盆， 置于微波炉内煮 14min。 8．分装，封口，标记。 9. 121℃高温灭菌 20min 。 1000ml 约一共分装 33 个瓶，加上实验老师给予的 3 个培养基我们组一共有 36 个瓶。 实验二：葡萄柚组培接种工作 实验时间：9 月 3 日 实验地点：西南林业大学 A 栋六楼接种实验室 实验过程： 准备材料及器材：葡萄柚脱毒苗、超净工作台，手套、剪刀（3 把）、镊子（3 把）、酒精灯两盏、无菌皿。 实验步骤： 1.接种前准备工作： 用酒精棉球将超净工作台台面擦拭一遍，然后将所需物品放入超净工作台内。 2.接种操作： ⑴将超净台的门打开至 1/3，带上手套，用酒精将双手进行消毒，反复揉搓双手使手上酒精挥发 完全，将手伸入超净台内。 ⑵点燃酒精灯。点燃前要确保手上的酒精已完全挥发，否则容易造成危险 打开无菌皿。 ⑶镊子消毒。先用手将报纸打开，后在酒精灯上灼烧（除手捏的地方不烧，其余的均要烧，烧 到烫为止。镊子用完都要放到特定放镊子的架子中，且每次用时均要灼烧消毒）。 ⑷挑拣材料。先将盛放葡萄柚脱毒苗的瓶子上的塑料膜取下。拿取镊子和剪刀（注意取放剪刀 与镊子时要绕过培养基的瓶口，防止污染）。用镊子将所需脱毒苗从玻璃瓶中夹到无菌皿上。 用剪刀及镊子小心的将脱毒苗的分支分开，将较高大的苗剪短。放在培养皿上备用。 ⑸接种：先将培养瓶的瓶口打开（拎着密封膜两角将密封膜揭起，将其朝向外面的一面向下置 于工作台上）。将培养瓶斜拿，在酒精灯前稍灼烧瓶口，后用镊子夹住葡萄柚插入培养瓶中 （注 意芽朝上，以免插倒），后将盖子密封膜盖上并用皮筋扎紧密封。整个接种过程要尽量在离酒 精灯十厘米内的地方进行，防止污染。 ⑹清理台面。把用过的废弃物及不用的东西拿出超净台，将台面用酒精擦净。关上超净台的门。 3.做记录： 在培养瓶上标上葡萄柚首字母大写，日期及编号，以便日后观察记录。 备注： 因小组成员有六名，所以是两个人同时进行的接种操作。每人接种 5~7 瓶，上一人接种完成后，将 剪刀、镊子用酒精灯灼烧消毒，放置于专用架子上。下一人进行操作时，用的是之前已灼烧消毒并 已冷却的剪刀与镊子，而不是上一人刚消好毒还有些灼热的剪刀与镊子。 接种实验过程图片如下： 9 月 3 日，小组成员在认真的进行接种 观察记录： 本小组一共有 6 人，编序号后进行培养基的接种，后续观察结果如下。 编号 1 组 2 组 3 组 4 组 5 组 6 组 总 瓶数 7 5 7 5 7 5 36 污染瓶 2 2 0 1 0