（可直接使用）核酸分子杂交与应用1.pptVIP

* * RNA酶保护分析法(RPA)：利用RNase A和RNase T1能专一性降解单链RNA而双链RNA受到保护的特点，用体外转录合成的放射性标记的RNA探针与待检mRNA 进行液相杂交，使互补序列RNA探针和待测RNA形成杂交体，用RNase降解非杂交部分RNA后分析杂交结果。 * * RNA酶保护分析法的应用： mRNA定量 mRNA未端定位 内含子在相应基因中的位置 * * * * RNA酶保护分析法的主要步骤： 1、制备待测RNA 从细胞或组织中提取总RNA或mRNA； 2、RNA探针标记 采用体外转录的方法制备和标记探针； 3、分子杂交：将待测样品RNA和RNA探针在液相中杂交，杂交前将样品和探针变性，破坏二级结构； 4、RNA酶消化单链RNA； 5、电泳分析杂交分子。 * * 核酸酶S1保护分析法(nuclease S1 protection assay)：原理与RNA酶保护分析法的原理类似，核酸酶S1能专一性地降解单链DNA和RNA，而不能降解DNA/RNA杂交双链。采用M13体系克隆和扩增特定基因的单链DNA片段，在合成过程中加入核素标记物，即可合成出高放射性的单链DNA探针。将探针与待测RNA样品在液相中进行杂交，形成DNA/RNA杂交双链。酶解后进行分析。 * * 核酸酶S1保护分析法可用于基因转录起始位点分析及内含子剪切位点分析。 液相杂交的优点：