论述常规病理组织学和组织化学.pptVIP

常用脱水剂：酒精、丙酮、正丁醇等。 1. 酒精 一股是从70％酒精开始，经80％—90％—95％—100％I一100II％，每步骤脱水时间根据材料大小而灵活掌握，一般数小时到12小时，更换一次酒精。 无水乙醇不适合用来配低浓度酒精，价格较贵。取95％酒精70ml加蒸馏水25ml，配成70％酒精95ml。 80％酒精取95％酒精80ml加蒸馏水至95ml即可，依次类推。 2. 丙酮 脱水作用与酒精相似，虽然其脱水作用比酒精强，但对组织块的收缩较严重，且价钱较贵，故不宜用于一股组织脱水。丙酮既有脱水作用，又有透明作用。 用丙酮固定的材料要小，脱水1一8小时即可。 演示课件 五、透明 组织块脱水后需要透明，因为水与蜡不能相交换，需要借助石蜡诱导剂的过渡。石蜡诱导剂渗入之后组织块往往呈现透明状态，习惯上将石蜡诱导剂渗入组织内的过程叫透明，而这种药剂称为透明剂。 透明的时间依组织块的大小而定，一般采用20分钟至1小时左右，如组织块过大可延长透明时间，透明好的材料如同油炸的感觉，呈透明状。 演示课件 最常用的透明剂为二甲苯、氯仿、甲苯、香柏油等。 二甲苯：是无色透明的一种有机溶媒，有很强的刺激气味，易挥发，长期接触对粘膜有刺激作用。 二甲苯透明组织的作用很强，可使组织收缩变形，故透明时间不宜过长。 透明过程中如遇到组织块内部或某一个部位呈白色混浊状态时，说明脱水不彻底，进而造成透明不彻底，无法下一步浸蜡。应退回到100％酒精中重新彻底脱水。 演示课件 六、浸蜡与包理 浸蜡的目的是为了能制备一菲薄的切片做准备。 将透明好的组织块浸到石蜡中，使石蜡渗透到组织细胞内，将组织细胞内的二甲苯完全彻底地取代出来，然后再用石蜡将组织包埋起来，冷却后，切成小块，修整好切面，再用切片机切极薄的切片，将这一过程称为浸蜡与包埋。 演示课件 蜡的种类：主要有两类： ⑴ 蜂蜡：是动物体内提取的蜡，颜色微黄，故也称为黄蜡，溶点在54℃左右。特点是润滑带有粘性，冬天用量比夏天多。 ⑵ 石蜡：是由矿物质中提取，质地较疏松，色白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡： 溶点在50℃以下的石蜡称为软蜡。 溶点在50℃以上的石蜡称为硬蜡。 两种蜡可以掺合在一起使用（没条件的情况下可用蜡烛来代替）。上海生物制品厂出的石蜡熔点有52℃—54℃，56℃—58℃，58℃—60℃，60℃—62℃这几种。 演示课件 具体操作： 1. 浸蜡 将石蜡箱温调至5 8℃—60℃左右，内有标明I、II、III等字样的蜡杯或蜡缸。 组织块从透明的二甲苯II取出之后，本身带有少量二甲苯，放入I号蜡杯中2—3小时左右，再将组织块移入II号蜡杯（纯蜡）2—4小时，最后移入III号蜡杯中（纯蜡）半天或者稍降蜡箱温度过夜。 注意：浸蜡时蜡杯不要颠倒顺序，以免脱苯不彻底。 如遇特殊情况需要延长浸蜡时间时可降低蜡箱温度或关闭蜡箱需要时再开。温度越高、时间越长，组织块收缩越严重，而且材料脆，不易切片。 演示课件 2 . 包埋： 包埋的方法多种，最常用的是石蜡包埋法。除此之外还有火棉胶包埋法、炭蜡包埋法、明胶包埋法及环氧树脂包埋法（电镜用）。冰冻切片采用水包埋法或特殊专用包埋剂包埋等。 包埋时用纯石蜡溶解后（60℃）倒入包埋框内或者用纸盒代替也可，迅速将浸好的组织块依次摆入框内，待蜡逐渐冷却凝固后就将组织材料一并凝结在石蜡内。然后按大小组织块切成蜡块，组织四周蜡边留0.1厘米左右即可。 包埋时组织块的切面向下、放平。如果操作不熟练或在冬天包埋时最好有一酒精灯，在材料包入石蜡之前稍在酒精灯上过一下（稍加一下温），以免材料与包埋蜡温度不符造成材料与包埋蜡有一痕迹，切片时产生分离现象。 蜡块上要烫上标记年号例号等字样的纸片以长期保存，切完的蜡块表面要用烫片板烫一下，封闭材料面，隔离空气接触，可长期保存材料不干。 目前主要用不同规格的包埋框包埋材料，在包埋机上操作，方便、快捷。 演示课件 七、切片 载玻片的准备、粘附剂的使用： ⑴.商品化准备好的载玻片：两端带有“＋”标志，无须处理，直接使用；比较昂贵； ⑵.常规载玻皮的处理： ①铬硫酸浸泡24小时，流水冲洗12小时，蒸馏水洗3遍，烘干，备用；玻片较干净时，也可用稀盐酸浸泡。 ②蛋白甘油：用鸡蛋清（不要鸡蛋黄）用玻璃棒充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚（防腐）。载玻片上薄层涂抹后晾干，备用。主要用于常规组织学、组织化学染色用。 演示课件 ③多聚赖氨酸（poly-L-lycine, PLL） 多聚赖氨酸（M.W=300kD） 0.5g 蒸馏水 100ml 配制方法：称取多聚赖氨酸，配制0.5%的水溶液，充分混合即可。也可适当稀释配成0.01%-0.5%浓度。