常用细胞免疫检测方法与其用途.pdf

细胞免疫功能检测常用有哪几种方法 一、 迟发型过敏反应的体外检测方法 皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应（ DTH ）的两种常用方法。皮肤 试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答， 而接触性过敏是测试受者对从未接触过的 物质发生致敏的能力。 1．皮肤试验 用皮肤试验诊断 DTH ，常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物（ PPD ）、腮腺 炎病毒、念珠菌素等，在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原， 24 ～48 小后，测量 红肿硬结的大小，硬结直径大于 10mm 即被看作为阳性。表明受试者对该病原菌有了一定 的细胞免疫能力，若皮试无反应，可用更高浓度的抗原重复试验， 若仍无反应即为阴性，需 排除皮试技术误差， 也可能受试者从未接触过此抗原， 也可能由于细胞免疫功能缺损， 或由 于细胞免疫功能缺损，或由于严重感染（麻疹、慢性播散性结核）造成的无反应性。 2 ．接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯（ DNCB ）诱发接触性过敏。化合 物与皮肤蛋白质结合而导致 DTH 反应。在动物试验时，初次皮肤上涂抹 DNCB 后间隔 7 ～ 10 天再激发刺激，则皮肤出现即为阳性。此试验人类已不使用。 二、细胞免疫的体外检测方法 体外检测淋巴细胞的数量和功能，最易采集的是血标本，首先需分离或纯化淋巴细胞， 一般使用萄聚糖 -泛影葡胺配成比重为 1.077 的淋巴细胞分层液，当将血液重叠于淋巴细胞 分层液之上离心时，由于红细胞（ 1.092 ）、多形核白细胞（ 1.090 ）、淋巴细胞（ 1.070 ）的 比重不同而相互分开。 淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。 仔细分出这 一薄层的细胞，其中淋巴细胞占 80% ，单核细胞占 20% ，淋巴细胞中 T 细胞占 80% ，B 细 胞占 4% ～ 10% ，其作为非 DT 、非 B 细胞。 1．T 细胞计数 （1）E 花环法：人类 T 细胞表面有 SRBC 受体（ CD2 ）能与 SRBC 结合形成玫瑰花 环样结构， 将经分层液分离现的 RBM 悬液与 SRBC 在含有血清的平衡盐水中混合， 经 37℃ 培养 5 ～ 10 分钟放 4℃过夜，取细胞悬计数，外周血淋巴细胞中约 70% ～80% 淋巴细胞结 成花环即为 T 细胞。目前此方法已用来分离 T 细胞，而不用做 T 细胞计数。 （2 ）用单克隆抗体计数 T 细胞：将人的 PBM 分成三等份， 分别用小鼠抗人 CD3 、CD4 和 CD8 的单克隆抗体作第一抗体与细胞结合，再用 FITC 标记的兔抗小鼠 IgG 抗体作第二 抗体进行间接免疫荧光染色，在荧光显微镜下或流式细胞仪检测结果，在 PBM 中被 CD3 抗体染上荧光的细胞称为 CD3 细胞即总 T 细胞。正常人在 PBM 中 T 细胞占 70% ～80% 。 正常人的 CD4 细胞和 CD8 细胞之和应与 CD3 细胞数一致。 CD4 细胞与 CD8 细胞的比 值正常人约为 2/1 而艾滋病患者则比值小于 1.7 。 2 ．T 细胞活化试验 T 细胞能被非特异的物质称为有丝分裂原所激活而向淋巴母细胞转 化。 T 细胞转化过程可伴随有 DNA 、RNA 、蛋白质的合成增加，最图导致