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文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 核酸探针筛选 cDNA 文库目的基因 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 未知序列目的基因的筛选 （ 1 ）从蛋白质寻找基因 ? 早期寻找基因的方法，对特异表达的蛋 白质进行序列分析，并推测一段核苷酸 序列，合成 DNA 探针，筛选分离相应的 基因。 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 目的基因 需要克隆的 DNA 片 段 建立高效表达系统 研究某基因结构和 功能的关系 研究某基因与 疾病的关系 确定其表达调控机 制和生物学功能 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 目的基因的克隆与基因文库的构建 A PCR 法 B 基因文库的构建法 C 化学合成法 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 1 、概念 ： PCR 全称为 _______________ ，是一项 在生物 ____ 复制 ___________ 的核酸合成技术 聚合酶链式反应 体外 特定 DNA 片段 2 、原理： DNA 复制 1 、利用 PCR 技术扩增目的基因 DNA 扩增 仪 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 四种脱氧核苷酸 一对引物 ： 耐热的 DNA 聚合酶 (Taq 酶） 模板 DNA( 需含有目的基因 ) 3 、条件： 一对 寡 核苷酸序列： 与目的基 因的起始段互补 。 一段已知目的基因的核苷酸序列，以便 根据这一序列合成引物 4 、前提： 能量 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 5 、过程 高温变性 （ 解旋为单链 ） 低温退火 （ 引物与单链互补结合 ） 适温延伸 （ 在 Taq 酶的作用下合成 与模板互补的 DNA 双链 ） 重复循环 预变性（ 增加 DNA 变性的概率 ） 引物 脱氧 核苷 酸 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 5 、具体过程 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 ① 概念： PCR 全称为 _______________ ，是一项 在生物 ____ 复制 ___________ 的核酸合成技术 ③条件： _______________________ 、 、 _______________ 、 ___________ 、 ___________. 等 ②原理： __________ ④方式：以 _____ 方式扩增，即 ____ （ n 为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定 DNA 片段 DNA 复制 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA 聚合酶 指数 2 n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 模板 DNA （含目的基因） ATP 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 ⑥过程： a 、 DNA 变性 （90℃ - 95℃）：双链 DNA 模板 在热作用下， _____ 断裂，形成 ___________ b 、退火 （ 复性 55℃ - 65℃）：系统温度降低，引 物与 DNA 模板结合，形成局部 ________ 。 c 、延伸 （70℃ - 75℃）：在 Taq 酶的作用下， 合成与模板互补的 ________ 。 氢键 单链 DNA 双链 DNA 链 文档来源于网络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 PCR 技术扩增与 DNA 复制的比较