噬菌体与杂菌的防治上课讲义.pptVIP

噬菌体的纯化和噬菌斑的形状 5.1.9 溶源性细菌与温和性噬菌体 ⑴烈性噬菌体 噬菌体侵入细菌细胞后，增殖很快，在较短时间内使细菌裂解。一般称这种噬菌体为烈性噬菌体。在谷氨酸发酵生产中遇到的多数为烈性噬菌体。 ⑵溶源性细菌和溶源性检查 ①溶源性细菌 有些细菌遭受噬菌体侵入后，并不立即裂解死亡。噬菌体侵入细胞后和寄主的遗传物质紧密结合一起，在没有再度感染的条件下，能随着细胞的繁殖，在子代细菌中代代相传，不断延续，这种细菌称为溶源性细菌。溶源性细菌通常可以自发地释放噬菌体，每一代有10-2~10-5细胞发生裂解，释放出具有感染能力的噬菌体。 ②溶源性检查 溶源性检查 在琼脂平板培养基上涂布指示菌，干燥后用接种环点20~25个被检菌培养液，经UV照射后培养，检查溶菌斑。 ⑶温和性噬菌体 产生噬菌体的潜在能力称作为溶源性，将具有溶源性的细菌称作为溶源性细菌，它所产生的噬菌体称温和性噬菌体，也称溶源性噬菌体。温和性噬菌体形成的噬菌斑是浑浊的，因为中央有溶源性细胞生成。反之，某些突变所形成的噬菌斑是清晰透明的。一般常规平板法很难把温和性噬菌体检查出来，只有在适当条件下转化为烈性噬菌体才易查出。 5.1.10 谷氨酸发酵噬菌体的主要特性 ①具有非常专一的寄生性 谷氨酸产生菌噬菌体必须在专一的寄主细胞中生长繁殖，不能脱离寄主而自行生长繁殖，也不能在培养基上增殖，只有在活的、处于繁殖阶段的寄主细胞中生长繁殖。 ②不耐热 不同噬菌体对热稳定性是不同的，但一般噬菌体都是不耐热的，会受热变性死亡。一般谷氨酸产生菌在60~65℃下10min全部致死，其噬菌体在70℃5~10min全部致死。 ③对pH 的稳定性 在pH7.0~9.0时稳定，在pH6.0以下和pH10.0以上时不稳定，容易失活，小于pH4.0时，完全失活。 ④嗜氧性 在低溶氧的条件下，其活性被抑制。 ⑤干燥条件下的稳定性 在非常干燥的状态下，5个月以上仍然稳定。噬菌体在干燥状态（相对湿度10%、30℃）比在湿润状态（相对湿度90%、30℃）稳定。 ⑥不耐药性 对药物很敏感，0.5%甲醛、0.5%苯酚、1.5%漂白粉、1%石灰、1%双氧水、0.5%高锰酸钾、1%新洁而灭，都可使谷氨酸产生菌噬菌体失活。 ⑦传播性 由于噬菌体极小，质量很轻，存活期长，所以地面上一旦存在噬菌体，则在一定范围的空气中必有噬菌体，空气流动使噬菌体得以传播。 ⑧在UV照射下失活 在液层5mm，距UV-15W灯15cm，照射2min，噬菌体完全失活。 5.1.11 噬菌体的感染途径和感染规律 噬菌体在自然界中分布很广，在土壤、污水、腐烂的有机物和大气中均有存在，凡是有寄主细胞的地方一般都存有它们的噬菌体，发酵车间、提取车间及周围更有机会积累噬菌体。造成噬菌体污染必须具备三个条件：①有噬菌体；②有活菌体；③有使噬菌体与活菌体接触的机会和适宜条件。 感染噬菌体的最初发源点：一是菌株携带噬菌体或菌株本身就是溶源性菌株。生产上使用的原始菌株本来就是由自然界筛选得到的，由于一部分溶源性细胞诱发成温和噬菌体，再经过变异就有可能成为烈性噬菌体，导致使用菌株感染，引起危害。更主要的原因是把活菌体排放到环境中，使生产环境中存在的噬菌体有寄主而不断增殖，结果使环境中噬菌体的密度增高而形成污染源。此外，活菌体与其有关的其它溶源性菌株接触，经过变异、杂交，最终发生使生产菌株溶菌成烈性噬菌体，逐渐增殖，污染环境。 一般来说，当环境中噬菌体浓度达到102~103PFU/mL，种子罐的噬菌体浓度达到104PFU/mL，主发酵罐的噬菌体浓度可达到106~107 PFU/mL；严重溶菌时，其浓度甚至可达1010PFU/mL以上。 5.1.12 谷氨酸发酵感染噬菌体时出现的主要症状 ①发酵液光密度（OD）在初期不上升或回降 ②pH逐渐上升且不再下降 ③耗糖缓慢或停止，周期延长，提取困难 ④产生大量泡沫、发酵液粘度大、发红、发灰 ⑤谷氨酸产量甚少，或者增长极为缓慢 ⑥镜检革兰氏染色呈红色碎片，找不到完整细胞 ⑦平板检查有噬菌斑 ⑧菌种对营养要求增大，但培养时间仍然延长 ⑨发酵后期感染时，有时产酸反而提高，这可能因噬菌体使菌体破坏而释放出细胞内谷氨酸的缘故 ⑩提取时难中和，谷氨酸呈糊状或泥状，分离困难，收率低。 5.1.13 噬菌体的防治措施 ⑴净化生产环境、消灭污染源 ①严格控制活菌体排放 ②搞好环境的监测