植病研究法 植物线虫病害研究技术.pptVIP

植物线虫病害研究技术 主讲人：吴彩兰 植物线虫病害研究技术 ? 第一节 植物寄生线虫的采集 ? 第二节 线虫的分离 ? 第三节 线虫玻片标本的制作 ? 第四节 线虫的培养 ? 第五节 线虫的接种 第一节 植物寄生线虫的采集 1. 线虫病的症状 植物受到线虫为害后，可以表现各种症状。有的表现为瘿瘤、叶斑、 坏死或整株枯死等，通常可以在病变部位找到病原线虫。但是多数线虫 病表现为变色、褪绿、黄化、矮缩和蔫萎等症状，这多半是根部受害造 成的。 大多数病原线虫并不在地上部，往往在根部或根际的土壤中可以 找到。 后一种类型的线虫病，在施肥或采取其他措施以后，植株的长势 可以暂时恢复，但不久又表现出原来的受害状。这类线虫病的危害性往 往容易忽视。 ? 植物的腐烂组织中，尤其是地下部分的器官，也常常发现有线虫，这就要注意区 别是腐生线虫还是寄生线虫。 腐生性线虫的主要特征是在水中十分活跃，口腔内 没有吻针，食道多为双胃型或小杆型，尾部很长，多为丝状。植物寄生线虫通常 都有发达的口针，尾部较短、尖削或钝圆。 ? 各属线虫的为害状不同：（ 1 ）茎线虫（ Ditylenchus ）主要为害植物的地下茎， 如块茎、鳞茎和块根等；（ 2 ）胞囊线虫（ Heterodera ）多寄生在植物根部支根 或须根的侧面，虫体裸露；（ 3 ）根结线虫（ Meloidogyne ）在新生的支根或侧 根上寄生后引起根结，虫体在瘤状组织中；粒线虫 (Anguina ）和滑刃线虫 （ Aphelenchoides ）主要为害植物的地上部分，虫体则常在茎杆的生长点或穗部； 可以传染植物病毒病的长针线虫（ Longidorus ) 、剑线虫（ Xiphinema ) 和毛刺线 虫（ Trichodorus ）等，在根部外寄生，在土中十分活跃，虫体较大，而且都有 发达的口针。伞滑刃线虫（ Bursapheleuchus ）中的松材线虫主要为害松树枝干 的木质部。 2. 标本的采集 （ 1 ）病变组织的采集 植物受线虫为害后，发生明显病变的部位，往往也是病原 线虫存在的部位。例如，小麦粒线虫（ Anguina tritici ）在籽 粒虫瘿中，水稻干尖线虫（ Aphelenchoides besseyi ）在穗 部籽粒颖壳的内侧，根结线虫和胞囊线虫等都在根部，茎线 虫则多在地下茎部。只要采集病变的组织器官，就能得到病 原线虫。 （ 2 ）病根、根际土壤和大田土样的采集 对于在根部内寄生的线虫，采取根样是很重要的；而对于在根部外营 寄生生活的线虫，则土样尤为重要。 由于线虫世代的交替与重叠，内寄生 线虫也有一段时期生活在土壤中，外寄生线虫在某一时期则在根部取食寄 生，因此 取样时应把根系和根际土壤一起采集 。 绝大多数线虫分布在耕作层中，所以都是在 0-20cm 的土层中采集土样。 采集土样最好在湿润的土壤中采，过于干燥和潮湿的土壤，其中线虫的存 活率低。因此，土样的采集最好是用特殊的采样器，有的是半筒状的，长 20- 30cm ，宽 20-25mm 。 （ 3 ）样本的保存 采到的标本或土样要防止干燥，写好标签后随即放在聚乙 烯薄膜袋中。不要用有色的或有气味的薄膜口袋，袋口要用 橡皮筋扎紧。 根系或土壤样本，放在冰箱中（4℃)，可保存 一定时期而不致损坏。 一般都在 5- 10℃温度下贮存。贮藏最 适宜的温度对各种线虫是不同的，在 5- 20℃之间，但13℃时 多数线虫都是能活动的。 第二节 线虫的分离 1 ．植物材料中线虫的分离 （ 1 ）直接观察分离法 胞囊线虫、根结线虫等根部寄生的线虫，可在解剖镜下用挑 针直接挑取虫体观察。对于一些虫体较大的线虫，如茎线虫 和粒线虫等，可在解剖镜下用尖细的竹针或毛针将线虫从病 组织中挑出，放在凹穴玻片上的水滴中，作进一步的观察和 处理。 （ 2 ）漏斗分离法 漏斗分离（ Baermann ）操作简便，是目前从植物材料中分 离线虫比较好的方法。将带有线虫的植物组织浸在水中，短 时间内在水中检查不到线虫；必须经过较长的时间，线虫离 开组织而游离到水中，才能从水中收集到线虫。 漏斗分离法 是使游离到水中的线虫，沉集在漏斗的底部。 它的装置是将 玻璃漏斗（直径为 10-15cm ），架在铁架上，下面接一段 （ 10cm 左右）橡皮管，橡皮管上装一个弹簧夹。 ?