降落PCR[文档整理] .pdfVIP

降落 PCR的原理及常见问题解答 回答： Touchdown PCR是指每隔一个循环降低 1°C 反应退火温度，直至达到 “Touchdown”退 火温度，然后以此退火温度进行 10 个左右的循环。该方法最初出现是为了避开确定最佳退 火温度而进行的复杂的反应优化过程。 正确和非正确退火温度之间的任何差异将造成每个循 环 PCR产物量的两倍差异（每摄氏度造成 4 倍差异）。因此相对于非正确产物，正确的产 物可以得到富集该方法的另一个应用是在确定已知序列肽的 DNA 序列。 具体过程如下： 使用两套与已知序列肽两末端可能配对的简并引物， 这只需要知道一段长为 13 个 氨基酸 的肽段序列， 5 ’和 3 ’引物各长 18 个碱基（ 6 个 氨基酸 ），两者之间有一个碱基 以上的间隔。使用简并引物即可以进行 “Touchdown PCR”。由这种方法将获得大量的产物， 但因为由肽序列可以知道引物之间的确切距离， 所以可以根据产