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武汉大学 探索性药理学实验设计书 课题名称： 大蒜素对甘油所致急性肾衰的保护作用 指导老师： 田卫群 实验设计者： 潘新发 吴南平 叶 钧 田 巍 王会仁 杜锦龙 张元杰 曾凡硕 专业和班级： 临床医学（五年制） 2003级11班 设计时间： 2005年11月16日 大蒜素对甘油所致急性肾衰的保护作用 一、立题依据与研究意义 大蒜素（allitridi ,Alt），化学名二烯丙基三硫化物，是大蒜的有效成分，现在国内外学者 对其研究很活跃，其药用和保健作用已被广泛认可,其生理学活性主要有：抗肿瘤、降低胆固醇、 抗血小板聚集、保肝、预防心血管疾病、降血压和血脂、抗衰老及记忆力下降、抗微生物活性等。 近年来，大蒜素在抗氧化方面的研究越来越受国内外学者的关注。李安民，王艾丽等人研究证实大蒜素能够减少CCl4 对肝细胞的急性损害, 推测其机理在于大蒜素具有抗氧化作用, 能够清除CCl4 对肝细胞膜作用产生的氧自由基, 从而减轻肝细胞膜的损伤, 对肝损伤有保护作用。郑敏, 丁虹, 汪晖等人的实验结果表明大蒜素可显著降低CCl4 及A PA P 肝损伤小鼠血清A ST , GST 活性及肝MDA 含量, 提示减少自由基的产生, 抑制膜的脂质过氧化从而维持肝细胞膜的完整性, 减少酶的溢出是其护肝作用机制之一。刘勇,仲来福研究表明大蒜素经口给予可减轻顺铂所致肾毒性,其机制可能与其强大的抗氧化和清除自由基活性有密切关系,还可能与其增强某些抗氧化酶的功能有关。罗阳，吴耕书等人也同样证实大蒜素有对抗氧自由基损害的功效。Helen A等对已被尼古丁导致的脂质过氧化作用的小鼠进行试验,发现服用大蒜油（大蒜素为其活性成分）的小鼠能明显增加抵抗尼古丁脂质过氧化作用。 甘油肾损伤是常用的急性肾功能衰竭模型，其损伤机制涉及氧自由基损伤,与反应性代谢产 物有关。本研究选择大蒜素作为干预物来观察其对甘油所致急性肾功能衰竭的影响,并初步探讨 大蒜素防治甘油所致急性肾功能衰竭的可能机制，以期寻找可预防或治疗急性肾功能衰竭的新 型化学药剂，为大蒜素临床应用防治急性肾功能衰竭提供一定的理论依据。 二、研究内容 研究大蒜素对甘油所致急性肾功能衰竭的影响及剂量效应关系并初步探讨其可能机制。 三、实验方案 实验对象：昆明种小鼠，雌雄各半，共85只 观察指标及测定方法： 肾指数(肾脏重量与体重之比,mg/g )：断头处死动物，摘取肾脏,去包膜称重并计算 肾指数 2、 血清学指标：血清尿素氮（BUN）（试剂盒）、肌酐(Cr) （试剂盒） 3、 组织抗氧化指标：肾匀浆丙二醛（MDA）（硫代巴比妥法）、超氧化物歧化酶（SOD） （邻苯三酚自氧化法[1]）、 4、 组织学检查：摘取肾脏，部分组织用10%福尔马林固定,石蜡包埋，常规组织切 片,HE染色,光镜观察。 药品和试剂：50%甘油（纯甘油对半与蒸馏水混合）、大蒜素（以4%阿拉伯胶分别配成0.5%、 0.25%、0.125% 的大蒜素混悬液）、阿拉伯胶、去离子水、生理盐水、10 %甲醛、H-E染色液、50mmol/LTris-HCl、8U/ ml肝素、37%盐酸、酒精、邻苯三酚、二甲苯、石蜡 仪 器：灌胃针头、注射器（0.5ml）、注射针头（4号）、天平、电子称、棉手套、试管数根、烧杯数个、剪刀（手术剪、眼科剪）、小镊子、（紫外）分光光度计、恒温水浴槽、离心机、光学显微镜、PP管、微量注射器、冰箱、匀浆机 实验方法： (1)预实验：先进行预实验选择合适剂量，正式实验剂量以预实验为准。 小鼠随机分为5组，每组5只。 (2)正式实验： 小鼠分为5组，每组12只。参照文献制备肾损伤模型[2]，实验动物24 h 内禁水不禁食， 选用24 h 内体重下降达10 %以上的动物,给予 50 %甘油10mg/kg，分别在大鼠两侧后肢肌 肉注射。 各组及处理如下： 组别 给药剂量 对照组 ig,阿拉伯胶20ml·kg-1· d-1 —— 模型组 40min后（造模），一次im,50%甘油10mg·kg-1 处理组 小剂量 ig,大蒜素2.5mg·kg-1· d-1 中剂量 ig,大蒜素5mg·kg-1· d-1 大剂量 ig,大蒜素10mg·kg-1· d-1 于甘油注射后72 h [5]断头处死动物。取血制备血清。摘取肾脏,称重,取左肾外上象限1/4的肾组织用10 %甲醛固定,余下每3.5 个肾脏合一,用50mmol/LTris-HCl 制成10 %组织匀浆,低温(4℃) 高速离心(9000×g)20 min 制备胞浆液(S9 ) , - 30 四、统计分析 实验数据用x ±s 表示，在统计软件上进行多组间ANOVA 方差分析，检验水准α= 0.05 。 五、创新性与可行性分