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DOC格式论文，方便您的复制修改删减 细胞分裂素检测方法的研究进展 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】细胞分裂素是一类重要的植物生长调节激素，对 这类激素进行超微定量检测对于揭示其在植物体内的信号转导机理、 发挥其对作物生长的调控作用具有重要意义。本文综述了近年来细胞 分裂素各种分析方法的研究进展，包括免疫分析法、气相色谱法、高 效液相色谱法、毛细管电泳法和电化学方法等，介绍了实际样品常用 的前处理方法，并讨论了未来的研究发展方向。 【关键词】细胞分裂素，免疫分析法，色谱法，毛细管电泳法，样 品预处理，评述 1 引 言 细胞分裂素(cytokinins，CTKs)是一类重要的植物生长调节激 素，在植物体内广泛参与各种生物过程。CTKs 可以促进植物根部的 形成，以及根部损伤的修复[1]。CTKs还影响叶绿体的制造和微结构 [2]，影响植物的光合作用和病原抵抗[3]等。目前, 已被确认的CTKs 有40余种[4], 所有的天然CTKs都是腺嘌呤衍生物。表1列出了典 型CTKs 的结构、名称和简称。根据其6位N 原子(N6)上取代基(R1) 的不同，常见的CTKs可分为3类: 异戊二烯型、异戊二烯衍生型和 DOC格式论文，方便您的复制修改删减 芳香型[4]。同时，根据其R2 的不同又可以将其分为自由碱基型、核 苷型、葡萄糖苷型和核苷酸型等。另外还存在3位N原子或7位N原 子上葡萄糖基取代的CTKs[5]。 CTKs在植物体内主要产生于RNA代谢过程[6]，生物学家已经能 够通过调节相关基因的表达来控制内源CTKs 的含量[7]，但是进一步 确定 CTKs 对植物生长的作用还需要准确的内源性CTKs 定量分析方 法。另外，植物体内的异戊烯基腺嘌呤(iP)等CTKs 的浓度还可以作 为反映植物生长环境状况和疾病情况的标志物[8]。 生物测试法(bioassays)是最早采用的CTKs 测定方法[9]，但是 这种方法的专一性和重复性都较差，分析过程复杂、工作量大，适合 作为CTKs 的定性分析方法，为理化分析方法提供生物活性方面的依 据。 由于CTKs在植物体内含量非常低(约为pmol/g)，因此，需要高 灵敏度的定量分析方法和高选择性的纯化富集样品前处理方法对其 进行分析。本文将从这两方面进行论述。 2 分析方法 2.1 免疫分析方法 免疫分析方法具有高效液相色谱法 (HPLC)等仪器分析方法所不 及的优势及特点：(1) 由于免疫反应的特异性，可用粗提产品直接检 测，从而显著提高了测试速度;(2) 免疫分析对特殊仪器的需求较少， 分析成本较低;(3) 免疫分析方法的灵敏度高。由于这些优点，免疫 分析方法一直在CTKs检测中广泛应用[10～21]。异戊烯基腺苷(iPR) DOC格式论文，方便您的复制修改删减 和反式玉米素核苷(tZR)作为免疫分析研究中的半抗原，所制得的抗 体对N6 上的取代基有较好的识别，即对于与半抗原R1 不同的分子交 叉反应较小。 最早用于CTKs 测定的免疫分析方法是放射性标记的免疫分析法 (RIA)[10～13]，分别实现了对iPR 类[10]和ZR 类[11]CTKs 的定量 检测。其中Weiler 等[11]制备的tZR 抗血清对tZ 和tZR 有高特异性， 对表1 典型细胞分裂素的结构、名称和简称[5, 40]很小，对tZR 的 检出限达到 15 pg，线性范围在0.02～10 ng。该方法被用于西红柿 果实粗提物中玉米素含量的测定。Trione 等[12]制备了抗 tZR 的单 克隆抗体，并将其用于tZR 的RIA 检测，灵敏度达到fmol 量级。 由于 RIA 需要专业的放射性物质操作技术以及特殊的实验室设 备，后来逐渐被更易普及和自动化的酶免疫分析 (EIA)所取代[14～ 21]。Hansen 等[14]利用抗tZR 多抗以及碱性磷酸酯酶标记抗原建立 了对tZR 和tZ 的检测方法，检测线性范围为0.3～30 pmol，同时利 用这种方法测定了在玉米茎中tZR和tZ 的梯度分布。Maldiney 等[15] 将生物素 亲和素体系引入ZR 的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法，使 得检出限可以达到3～5 pg，线性范围在1～1000