现代科技综述知识文库：小鼠胚胎性干细胞.pdf

现代科技综述系列—— 小小鼠鼠胚胚胎胎性性干干细细胞胞 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “小鼠胚胎性干细胞” 的解读，以供大家了解。 小小鼠鼠胚胚胎胎性性干干细细胞胞 20世纪60～70年代，人们一直在致力于寻找一个具有 类似胚胎细胞分化性质，又能源源不断取材的实验模 型。 胚胎性癌细胞(EC细胞)是畸胎瘤干细胞，既有恶性生 长，又显示类似早期正常胚胎细胞发育多能性的双重 性质(L ．C ．Stevcn ，1964) 。 随后70～80年代间，EC细胞就一直成为研究哺乳类胚 胎发育 遗传的模式系统。 由于EC细胞具有肿瘤的某些特性，包括核型的不正 常，作为研究正常发育的体外模型仍不够理想，直至 1981年直接从小鼠早期胚胎内细胞团建立了胚胎干细 胞(ES细胞)系，才有助于进一步解决研究哺乳动物胚 胎发育 遗传的模型问题。 EC细胞是胚胎性恶性畸胎瘤组织的干细胞，起源于生 殖细胞 早期胚胎细胞。 异位移植12 ．5～13 ．5d的小鼠生殖嵴或8d前的小鼠胚 胎，都能诱发出恶性畸胎瘤。 要成功地分离获得EC细胞，首先要进行动物肿瘤的体 外培养并传代 筛选，然后才能达到建系或克隆目 的。 丛笑倩等(1984年) 曾从小鼠自发畸胎瘤细胞培养，建立 了多能B7EC细胞系，也从F9EC细胞细胞系克隆到F9 －1 F9 －3两个克隆亚株。 这些细胞株在生长行为，分化发育潜能以及对维生素A 酸(RA)反应的敏感性等方面均有所不同。 根据胚胎移植实验，证明不同品系小鼠形成畸胎瘤频 率是受遗传因素影响的，例如C3H BALB纯系小鼠产 生含有EC细胞畸胎瘤约为50 ～70 ；相反，其他品 系如AKR C57BL小鼠却很少产生这类肿瘤(I． Danjnov D ．Solter ，1982) 。 胚胎异位移植实验进一步表明，影响肿瘤生成的主要 因素是宿主本身的遗传背景，而不是被移植胚胎的遗 传因素。 在常规培养条件下，小鼠胚泡极易分化为各种细胞。 曾有人提示，有可能把胚泡的ICM细胞经体外培养建 立分化型的永久细胞株。 但人们更多的注意力是在于如何阻止ICM细胞体外分 化，使之继续增殖。 循着这个方向，M ．J ．Eeans M ．H ，Kaufman(1981 年)通过延误胚胎着床，分离晚期胚泡，并直接培养在 用丝裂霉素处理过的小鼠成纤维细胞饲养层上。 再经胰酶消化使ICM细胞团增殖从而得到多个原始的 ICM细胞克隆，最终建立了未分化的ES细胞系。 同年，有人用免疫手术法(Immunosur-gery)分离ICM细 胞，在上述的饲养层上用EC细胞的条件培液培养，也 得到未分化的ES细胞系，后来进一步简化了延缓胚胎 着床或免疫手术等复杂步骤，直接把晚期囊胚接种在 饲养层上，也成功地建立了EC细胞株(H ．R ．Axelord E ．Lader ，1983年) 。 丛笑倩 C ．Mummery 以及H ．R ．Eistetter ，(1989)先 后报道，用小鼠的16～20个细胞的桑椹胚分离得到了 EC细胞系，它的成功率比胚泡期ICM 的要高得多，46 个桑椹胚得到17个细胞系，占37 ；而108个胚泡只能 得到9个细胞系，仅占9 。 这可能由于所培养的桑椹期细胞是单个的，因而减少 了促使细胞分化的相互接触 影响，使得这些单个细 胞容易增殖，从而使EC细胞的建系成功率远高于发