现代科技综述知识文库：细菌抗砷特性.pdf

现代科技综述系列—— 细细菌菌抗抗砷砷特特性性 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “细菌抗砷特性” 的解读，以供大家了解。 细细菌菌抗抗砷砷特特性性 1968年，Novick等对金黄色葡萄球菌进行的研究表 明，该菌的砷抗性与3个质粒(现已知是pI258、pI147 pI524)有关，决定砷酸盐 亚砷酸盐抗性的遗传决定子 是相互独立的。 1973年，Hedges等在大肠杆菌中发现质粒R773对砷酸 盐 亚砷酸盐具有抗性。 并证明了在革兰氏阳性菌的革兰氏阴性菌中决定砷抗 性的是质粒，为从分子 基因水平上了解细菌抗砷机 理打下了基础。 1981年，Silve 等发现了大肠杆菌 金黄葡萄球菌的砷 抗性是可诱导的，砷酸盐、亚砷酸盐 亚锑酸盐都可 作为诱导物，抗性质粒的存在不改变大肠杆菌已有的 磷酸盐吸收系统，表明抗性质粒提供了一个专一性的 砷酸盐转移系统。 1982年，Silve Keach 以及Mobley Rosen都证明了在 大肠杆菌中，由质粒控制的对于砷酸盐、亚砷酸盐 亚锑酸盐的抗性包括一个初级的含氧阴离子泵的作 用，该作用不依赖电化学的质子梯度，而是利用细胞 内的ATP作为阴离子转移的直接化学能。 1983年，Mobley等首先将大肠杆菌质粒R773上的4 ． 3kb抗砷片段克隆到质粒pBR322 中，得到一个重组抗 砷的质粒pUM3 ，证明了在大肠杆菌中决定抗砷特性的 是一个单一基因簇编码的含氧阴离子转移系统，此基 因簇位于9 1kb 的抗性质粒R773上，称为a s操纵元，该 操纵元可被元素周期表第Ⅴ族元素的含氧阴离子诱 导。 Chen等(1986) San F ancisco等(1990)分别对大肠杆菌 a s操纵元进行了序列分析，证明了该操纵元含有4个基 因，分别命名为a sR ，a sA，a sB ，a sC基因。 1992年，Ji Sive 将含有抗砷决定子的金黄色葡萄球菌 质粒pI258 以两种方向克隆到质粒pSK265 中，得到质粒 pGJ 10 1 pGJ 102 ，这两个质粒都表现出了与pI258相同 的抗砷酸盐、亚砷酸盐 亚锑酸盐的特性，说明砷抗 性与与pSK265 的阅读架(ORF)方向无关。 另外，他们将pI258克隆到质粒pUC 19 的LacZ基因位点 中，得到一个新的抗性质粒pGJ 103 ，将该质粒转入大 肠杆菌中，发现转化子对砷酸盐 锑酸盐有较低水平 的抗性，对亚砷酸盐则有较强的抗性，说明葡萄球菌 的抗砷决定子能够在大肠杆菌中发挥作用。 通过对pI258的序列分析，他们证明了在pI258 中，决定 砷抗性的主要是3个基国：a sR ，a sB ，a sC 。 以上实验结果表明，大肠杆菌的a s操纵元与金黄色葡 萄球菌的a s操纵元在结构上不完全相同。 在金黄色葡萄球菌中，与大肠杆菌a sA基因同源的基 因是缺失的，a sR基因与a sB基因直接相连。 但这两种菌的抗砷过程非常相似，都是由a sR基因编 码的阻遏蛋白A sR调控的。 A sR蛋白的特性 利用启动子探测载体，从质粒R773上 克隆到的727bp 的EcoRI-HindⅢ片段与a s操纵元的抗砷 调控有关，这一片段包含了a sR基因，其基因产物 A sR蛋白经证明是一种反式作用调节蛋白，分子量为 13kD ，尽管它必须结合到DNA的操纵部位才能发挥作 用，但未发现有可识别的DNA结合位点。 另外，质粒R773 的砷抗性是诱导型的，而重组质粒 pUM3 的砷抗性则是组成型的，这说明在pUM3 中起调 控作用的a sR基因缺失，现证明在pUM3 中操纵元结