现代科技综述知识文库：酶法分离胚囊.pdf

现代科技综述系列—— 酶酶法法分分离离胚胚囊囊 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “酶法分离胚囊” 的解读，以供大家了解。 酶酶法法分分离离胚胚囊囊 酶法分离胚囊为进一步研究被子植物的雌配子体开辟 了新途径。 酶解法分离出的胚囊，立体感强，保持完好的整体 性。 此方法操作简单，特别适合于进行大孢子 胚囊发育 时期的研究。 结合组织化学与细胞生理学研究，可以更深入了解胚 囊的生理生化特征，同时还可与正在发展中的遗传操 作 生物工程技术相结合，从而开创受精工程的新领 域。 1960年，Forbes用酶解法分离雀稗属植物成熟胚囊成 功，采用的是酶解涂抹技术，将雀稗属植物的子房酶 解、染色后，在解剖镜下手工剖出胚囊进行观察。 此后，国内外对胚囊的酶解给予重视。 70年代以来，前苏联萨拉托夫大学的Тырнов、 ЕналeeBa等人在这方面开展了大量工作，根据从文献 中了解的简略情况，他们已由10科25种植物的固定胚 珠材料中分离出完整的胚囊进行显微观察，烟草、列 当生活胚囊也已分离成功，并尝试进行离体培养，但 未曾报道具体方法。 前苏联研究者多用自制的蜗牛胃液酶辅以果胶酶。 在中国，近年来许多研究者也已试验成功。 从现有资料看，Eналeeвa等 中国研究者的方法虽然 不尽相同，但在酶解与机械振荡相结合，不用徒手解 剖方法分离胚囊这一点是一致的。 此法可以同时制备大批材料，尤其适于分离体积小或 较为幼期的材料。 1982年，周嫦、杨弘远用果胶酶与纤维素酶的混合液 由烟草、蚕豆与紫菜苔的胚珠中分离出完整的胚囊， 这一实验结果证明酶法分离胚囊是一项切实可行的新 技术，具有操作简单、快速，能保持胚囊的完整性以 及显微镜观察效果良好等优点。 1984年，杨弘远、周嫦又在泡桐与芝麻两种植物上作 了更系统的工作，收到肯定效果，表明这一技术特别 适用于多胚珠材料大孢子发生时期的快速鉴定。 此外，如欲进行显微光度测定，采用未切破的整体细 胞也是有利的。 接着，周嫦、杨弘远在金鱼草上，首先以固定胚珠为 材料，分离出受精前特别是受精后不同时期的胚囊， 并在此基础上试探分离活的胚囊获得成功。 这个实验有两方面进展，一方面，不仅分离出受精前 的胚囊，而且也分离受精后的胚囊 从花粉管进入胚囊 直至上百个胚乳细胞时期) ；另一方面，不仅由固定材 料而且也初步由新鲜胚珠中分离出受精前后的胚囊。 1985年，胡适宜等从新鲜烟草胚珠中分离出胚囊细胞 的原生质体，包括卵细胞、助细胞、中央细胞 反足 细胞的原生质体，这是第一次成功，表明被子植物裸 露的雌配子原生质体能被分离，在遗传操作 植物细 胞生物工程中的应用，显示出巨大的潜力。 此外，在分离花粉管原生质体方面，他们也已获得初 步成功，其中一部分原生质体是含有核的。 如能将分离的带雄核的及带雌核的原生质体在体外融 合，则这一离体条件下人工控制的融合程序接近自然 的受精作用，他们称为受精作用的体外模拟。 由于分离的雌雄性细胞的直接融合，在育种工作中作 为组合不同基因组、创造新物种的一种途径，具有独 特的价值。 关于酶解胚囊方法，中国学者先后建立起两种酶解分 离胚囊的方法，即酶解过程结合连续振荡法 酶解压 片法。 1990年，邓秀新等以几种果树为材料，利用酶解方法 分离胚囊，获得较好的结果。 199 1年，邱德勃等用酶解压片技术又成功地分离巴西 橡胶树 番木瓜两种热带作物不同时期的胚囊。 酶法分离胚囊是一种探索中的技术，迄今还是不太成 熟，存在的问题首先是酶解的效果亦因植物种类、发 育时期与组织性质的不同而异，酶解效果不够稳定， 容易发生破损或质壁分离，易受胚囊发育时期、酶的 种类与浓度、酶液的H+浓度、酶解温度与时间等多