纳他霉素发酵生产实验报告.pdfVIP

纳他霉素的发酵生产、分离纯化及检测 （广州大学生物工程系，广州 510006 ） 摘要：本实验利用褐黄孢链霉菌斜面菌种，先取约 5 个接种环的斜面菌种无菌接种到 2 瓶种 子液体培养基中培养 24 小时，再分别在无菌条件下用移液枪吸取 1mL 种子培养基转接到 6 瓶发酵培养基，摇瓶发酵 48 小时后，连续 3 天吸取菌液进行镜检，菌液 OD 值测定，并利 用 500 μg/mL 的纳他霉素按照0mL,0.2mL,0.4mL,0.6mL,0.8mL,1.0mL 加入量制定标准曲线； 摇瓶发酵 5 天后，合并发酵液，离心获得菌泥，采用 2 倍菌泥体积的 95%酒精，pH 值在 10~10.5 搅拌溶解纳他霉素；离心保留上清液，上清液在 Ph 值在 6.5，冰箱静置 3h，纳他霉 素在等电点析出；离心，保留产物；产物在 55℃真空干燥2h ，称重获得0.08g 的纳他霉素。 关键词：褐黄孢链霉菌；种子培养基；发酵培养基；等电点溶解；真空干燥 引言：纳他霉素是一种多烯烃大环内酯类抗真菌剂， 其分子是一种具有活性的环状四烯化 合物，含 3 个以上的结晶水，其外观白色（或奶油色），为无色、无味的结晶粉末，分子式 C33H47NO 13，分子量为 665.73 。微溶于水、甲醇，溶于稀酸、冰醋酸及二甲苯甲酰胺，难溶 于大部分有机溶剂。在 pH 值高于 9 或低于 3 时，其溶解度会有所提高。纳他霉素具有一定 的抗热处理能力，在干燥状态下相对稳定，能耐受短暂高温（100℃）；但由于它具有环状化 学结构、对紫外线较为敏感，故不宜与阳光接触。纳他霉素活性的稳定性受 PH 值、温度、 光照强度和氧化剂及重金属的影响，所以产品应该避免与氧化物及硫氢化合物等接触 [/view/727567.htm]。 纳他霉素( Natamycin) 是由一种纳塔尔链霉菌( St rep tomy ces natal ensi s ) 发酵产生的 一种二十六元多烯大环内酯类抗生素, 能有效地抑制和杀死霉菌及酵母菌,是一种安全、 低 [ 1] 毒、 高效、 广谱的抗真菌抗生素和天然的生物防腐剂 与其它抗菌产品相比,纳他霉素对 哺乳动物细胞的毒性极低, 可广泛应用于由真菌引起的疾病.除此之外,纳他霉素的低溶解度, 可用其对食品表面进行处理以增加食品的保质期, 不影响风味和口感. 目前,全球有 30 多个 国家批准将纳他霉素用于乳制品、 肉制品、 果汁饮料、 葡萄酒等的生产和保藏[ 2] 。纳他 霉素的需求量增加, 市场前景巨大。 纳他霉素主要由恰塔努加链霉菌(S trep tomy cescha t tanovg ensis)、纳塔尔链霉菌 (S trep tomy ces na tu2lonso)和褐黄孢链霉菌(S trep tomy ces g ilvosp oreus)产生。 在发酵过程中，培养液中各成分的浓度和类型都会影响纳他霉素的生物合成，其中碳氮 比是最关键的因素之一，氮源促进菌体的生长繁殖，同时要在发酵中流加补充适当的碳源。 [ 3] [ 3] 纳他霉素在以葡萄糖最为碳源时产量最高 。因为葡萄糖能够渗入纳他霉素分子之中 。氮 源类型对纳他霉素的产量有较大的影响。有资料表明，菌体细胞生长最好的氮源是酵母提取 物，而纳他霉素产生的最佳氮源为牛肉浸出物[ 3] 。 1.实验材料与方法 1.1 材料： 第 1 页，共 8 页 1.1.1 发酵菌种：褐黄孢链霉菌 1.1.2 培养基： 孢子斜面培养基：酵母提取粉 4g/L ，麦芽提取粉 10 g/L，葡萄糖4 g/L ，琼脂20 g/L ； pH7.0 摇瓶种子培养基：葡萄糖 15 g/L，蛋白胨 10 g/L，氯化钠 10 g/L；pH7.0 摇瓶发酵培养基：大豆分离蛋白 19.5 g/L，麦芽糊精 50 g/L，酵母提取粉4 g/L 葡萄糖 6 g/L ，pH7.0 1.1.3 实验试剂：酵母提取粉，葡萄糖，琼脂，蛋白胨，氯化钠，大豆分