小鼠腹腔巨噬细胞收集及形态观察.pptVIP

二 实验原理 ? 巨噬细胞（ M Φ）发育：骨髓多能干细胞→定向干细胞 （髓样干细胞）→单核母细胞→前体单核细胞→单核 细胞→血液→组织（分化为巨噬细胞） ? M Φ分布：单核细胞主要于血液中，巨噬细胞几乎存在 于所有表皮和黏膜下组织。 ? M Φ形态：有伪足，马蹄状单核，细胞形体大。 ? M Φ分离纯化：小鼠和大鼠腹腔内有丰富的巨噬细胞， 可用腹腔清洗的方法获得较多细胞悬液。正常小鼠每 只可收集腹腔渗出细胞 10 6 ，其中 30% 为巨噬细胞，如 果给小鼠腹腔注射某中刺激物，可使巨噬细胞渗出增 加，易于分离更多的巨噬细胞。 ? 纯化：巨噬细胞易于沉降和贴壁，对 X 射线不敏感，而 淋巴细胞和成纤维细胞对 X 射线敏感。 三 材料与器材（略） 四 操作步骤 （ 1 ）将小鼠以颈椎脱臼法处死，仰卧，固定四肢。 （ 2 ）依次用碘酒及酒棉球消毒腹部，以镊子提取腹壁，剪 去一小块皮肤，继以镊子提取腹腔。剪一小口。以注射 器注入少量冲洗液。用滴管吸出，再注入冲洗液并吸出， 滴管在腹腔内各个位置吸取液体，冲洗每只小鼠腹腔约 共 5 mL （ 3 ）将腹腔细胞悬液滴于干净玻片上，置 37 ℃ 湿盒内。 1 ～ 2h 后倾去玻片上的液体。并用腹腔冲洗液轻洗玻片， 即可见玻片上有毛玻璃样的单层核巨噬细胞粘附，巨噬 细胞含量可达 90% 。 （ 4 ）在显微镜下计算巨噬细胞的百分比，以检测分离结果