(M)2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体(复习).pptVIP

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合 又称为细胞杂交。指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 （一）.动物细胞融合概念 为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 一、动物细胞融合 （二）.原理： 细胞膜的流动性。 （三）.促进细胞融合方法 物理法：电激、振动、离心等 化学法：聚乙二醇（PEG） 生物法：灭活的病毒（最常用） 不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞（杂交细胞）进行有丝分裂 （动物细胞培养技术） （四）. 动物细胞融合过程 产生杂交细胞，即具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 （五）. 结果 最重要的用途是制备单克隆抗体。 （六）. 用途 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 生物：灭活的病毒 物理（离心、振动、电激） 化学（聚乙二醇） 诱导融合方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合过程 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞的全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 （七）植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较 人们获得抗体的传统方法是什么? 动物体内 刺激 抗体 筛选单一浆细胞 不能无限增殖产生大量抗体 抗原 浆细胞 这种方法的缺点是什么? 产量低、纯度低，制备的抗体特异性差。 血清 二、单克隆抗体 每一个浆细胞只能产生一种特异性抗体 体内产生的特异性抗体多达百万种 如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞 骨髓瘤细胞能无限增殖 + 一个浆细胞只分泌一种特异性抗体 设计方案： （一）.单克隆抗体的概念 由单个B淋巴细胞（浆细胞）经过克隆形成的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 （二）.单克隆抗体的制备过程 （二）.单克隆抗体的制备过程 （二）.单克隆抗体的制备过程 诱导融合 选择培养基 继续培养，筛选 克隆能产生抗体的阳性细胞 体外培养或小鼠腹腔内增殖 动物细胞融合 动物细胞培养 给小鼠注射特定的抗原蛋白 B淋巴细胞（免疫） 骨髓瘤细胞 杂交细胞 杂交细胞（ B-瘤细胞） 单克隆抗体 杂交瘤细胞 瘤-瘤细胞 B-瘤细胞 B-B细胞 第一次筛选 第二次筛选 骨髓瘤细胞是癌细胞吗？ 有无限增殖能力（丧失凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞。肿瘤细胞不等于癌细胞。 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。 细胞融合——两两细胞融合三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活）。 第二次筛选：对已经选择性培养的杂交瘤细胞进行“克隆化培养”，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的即是所需要的杂交瘤细胞。 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 提取单克隆抗体。 单抗的制备过程要点： 2、为何要进行两次筛选？ 第1次筛选得到杂交瘤细胞（有多种）。 第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 1、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 特异性强，灵敏度高，可大量制备。 （三）.单克隆抗体的优点 1、作为诊断试剂： 具有准确、高效、简易、快速特点. 2、用于治疗疾病和运载药物： 主要用于癌症治疗。 生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。） （四）.单克隆抗体的应用 1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。 诱导融合方法有所不同：动物细胞诱导融合所用的方法比植物体细胞杂交多一类灭活的病毒诱导； 结果不同：植物体细胞杂交培养成了杂种植株，而动物细胞融合只培养出了杂交细胞。 例：已知细胞增殖时合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。 人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。