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综述细菌原生质体融合进展 冯丹 （10 级 杏坛生工 201012401007） 摘要：原生质体融合技术由于可以在种间、属间及科之 间构 出新型菌株，已成为一项公认的快速组装新物种，尤其是微生物 新物种的基因工程技术。在细菌、酵母菌、真菌等遗传育种方面被 广泛应用。文中综述并举例说明原生质体的制备与再生技术与影 响因素、原生质体形成率及原生质体融合条件。介绍了细菌原生 质体融合技术在遗传育种中的应用，并展望了细菌原生质体融合 技术的发展前景。 关键词 ：原生质体融合；原生质体制备 ；融合条件；融合子 细菌原生质体融合 (bacterial protoplast fusion)是20世 纪70 年代发展起来的重要基因重组技术。1976年FODORK等【l 】采用聚 乙二醇(PEG) 、磷酸钙诱导 巨大芽孢杆菌 (Bacillusmegateriutrb原 生质体的融合，SCHAEFFER P等【2 】翻报道了用PEG诱导枯草芽 孢杆菌(B ．subtillis) 的原生质体融合， 2项重要研究成果同时发 表在美国科学院院报上，是细菌原生质体融合技术发展的里程碑。 细菌原生质体融合育种技术不但可以改良菌种遗传性状、提高有 用代谢产物产量，还可以综合不同菌株代谢特征，产生新的有用 代谢产物，在工业生产和遗传育种上展示出美好的应用前景。 1．细菌原生质体制备和再生 1．1细菌原生质体制备 制备细菌原生质体，是进行原生质体融合的前提和基础，不 同细菌细胞壁组成各不相同，所以制备原生质体最佳条件也存在 着很大差异。在制备细菌原生质体 时，曾采用过机械法脱壁，但 原生质体制备数量有限而且容易使原生质体受到损伤，不利于再 生。目前主要使用酶法脱壁，绝大多数细菌使用溶菌酶作为工具 酶 ， 但 也 有 例 外 ， YOSHINO S等 旧 制 备 糖 丁 醇 乙 酸 梭 菌 (Clostridium saccha ．roperbutylacetonicum) 原 生 质 体 时 ， 除 使 用 溶菌酶外，还使用了N ．乙酰胞壁酸．L ．丙氨酸酰胺酶 ；张莉滟等 【3】制备长双歧杆菌 (Bifidobactefium longum)原生 质体 时，使用 5mg／L 的变溶菌素 (Mutanolysil~进行菌体脱壁。而且使用的最 适溶菌酶浓度为0 ．1mg／ml_~2 ．Omg／mL 。 1．2细菌原生质体再生 酶解脱壁后的原生质体应该具有再生能力， 是原生质体融 合育种的必要条件。细菌原生质体再生包括壁再生、功能修复、分 裂和萌发 些相互联系而又具有一定独立性的生理过程。尽管原 生质体具有生物活性，但它不是正常细胞，在普通培养基平板上 不能正常的生长、繁殖。影响原生质体再生的因素主要有菌种本 身特性、原生质体制 备条件、再生条件和操作方式等，尤其是原 生质体制备时酶浓度和酶解 时间对原生质体再生的影响较大，酶 浓度过大、酶解 时间过长则再生率降低。对数生长期细菌在原生 质体再生过程中能明显提高再生率。 (1) 原生质体形成率P= （经酶处理后形成的原生质体数÷ 未经酶处理的总菌落数）*100% (2) 原生质体再生率Rp =(能再生的原生质体数÷ 经酶处 理后形成的原生质体数)*100% 1.21以苏云芽孢杆菌 为例 论述影响原生 质体形成率与再生 率的因素 青霉素对原生质体形成率(P) 的影响 裹 1 青霉素浓度对破璧效果的影响 青霉素浓度（u*ml-1） 1*(%) 2* （%） 0 28 30 0.4 46 58 0.8 50 67 1.2 47 65