动物性食品中禽流感病毒检验.pptVIP

知识目标： 了解禽流感病毒的生物学特性 掌握禽流感病毒检验方法 掌握禽流感病毒的卫生评价与处理 禽流感病毒 禽流感（AI）是由A型流感病毒引起的禽类的一种严重疾病。感染后的家禽可表现亚临诊症状、轻度呼吸系统疾病、产蛋量降低或急性全身致死性疾病。 病毒广泛分布于各种家禽和野禽。从迁徙水禽，尤其鸭中分离的病毒最多；流感在家禽中对火鸡和鸡的危害最严重。 美国为扑灭1983年秋至1984年暴发的禽流感（H5N2），花费高达6千万美元。香港地区为扑灭1997年的禽流感（H5N1）也付出了巨大代价，不仅使大批鸡死亡，而且造成13人感染禽流感病毒并发病，其中4人死亡。我国2005年冬在很多地方也发生了禽流感疫情，严重影响了禽肉产品的出口，给养殖业带来很大损失。 禽流感（AI）的潜伏期从几个小时到几天不等，其长短与病毒的致病力高低，感染强度，传播途径和易感禽的种类有关。 由A型禽流感病毒所引起的禽流感，因感染禽的种类、年龄、性别、并发感染情况及所感染毒株的毒力和其它环境因素等不同而表现出的症状很不一致，症状可涉及呼吸道、消化道、生殖道及神经系统。通常呈现体温升高，精神沉郁，饮食欲减少，消瘦，母鸡产蛋量下降。呼吸道症状表现不一，如咳嗽、喷嚏、罗音、甚至呼吸困难。病鸡流泪，羽毛松乱，身体卷缩，头和颜面部水肿、皮肤发绀（冠和肉垂），有神经症状及下痢。以上这些症状可能单独出现，或几种同时出现。 禽流感特征性病理变化为水肿、充血、出血。急性型典型症状为心肌炎、心包炎，腺胃乳头水肿、出血，肌胃角质层下出血，肌胃与腺胃交界处呈带状或环状出血，呼吸道有大量炎性分泌物或黄白色干酪样坏死，气管粘膜出血。 一、生物学特性 流感病毒为正粘病毒科流感病毒属的成员，根据核蛋白（NP）和基质蛋白（MP）的不同可分为A、B、和C三个血清型。A 型流感病毒能感染多种动物，包括人、禽、猪、马、海豹等，B型和C型则主要感染人。而且A型流感病毒的表面糖蛋白比B型和C型的变异性高。 A型禽流感病毒的HA已发现16种，NA有10种，分别有H1～16，N1～10命名。 将无菌有感染性鸡胚囊液1：10稀释后，静脉接种8只4～8周龄易感鸡，每只0.2mL。接种后10天内死亡率≥75%，为高致病性禽流感病毒。 分离物符合上述标准后，其它鸡群可依据流行病学、临床症状及相同亚型血凝素抗体测定来确定是否为感染高致病性的禽流感病毒。 如果致病力试验中致死率不足75%，或血凝素为H5及H7亚型的病毒，需要进一步的试验和验证。 如果分离的禽流感病毒只能致死8只中的1～5只，但能在没有胰蛋酶存在的细胞培养物上生长并能产生细胞病变（CPE）或形成蚀斑，则必须先测定其HA相关多肽的氨基酸序列后才能宣布该分离物是否为高致病性毒株。 病毒形态 甲型流感病毒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段 单股负链RNA。依据其外膜血凝素（H）和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性的不同，目前可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。感染人的禽流感病毒亚型主要为H5N1、H9N2、H7N7，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。 研究表明，原本为低致病性禽流感病毒株（H5N2、H7N7、H9N2），可经6～9个月禽间流行的迅速变异而成为高致病性毒株（H5N1）。 流感病毒 抵抗力 禽流感病毒对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂均敏感。常用消毒剂容易将其灭活，如氧化剂、稀酸、十二烷基硫酸钠、卤素化合物（如漂白粉和碘剂）等都能迅速破坏其传染性。 禽流感病毒对热比较敏感，65℃加热30min或煮沸（100℃ ）2min以上可灭活。病毒在粪便中可存活1周，在水中可存活1个月，在pH﹤4.1的条件下也具有存活能力。病毒对低抗温抵力较强，在有甘油保护的情况下可保持活力1年以上。 病毒在直射阳光下40～48h即可灭活，如果用紫外线直接照射，可迅速破坏其传染性。 1.病原的分离 病毒分离：AI的诊断通常是要靠病原的分离及病毒血清型和亚型的鉴定。通常情况下，禽类只感染A型流感病毒。 病料采集：病毒常在呼吸道和/或消化道中复制增殖，所以采集病料多从气管或泄殖腔中采集。 方法：以棉花或其它材料制成的拭子采集病料样品，放入加抗生素的无菌培养液中。 保存：最好低温（4℃）或-70℃保存，以液态氮或干冰较好。病料样品在保存或运送前可先行处理，制成10%的悬液，并进行低速离心澄清。 病毒的培养： 通常用于病毒分离的材料是鸡胚（应该用SPF鸡胚），鸡胚细胞培养物也可供病毒增殖。取0.1mL处理好的病料，以尿囊腔途径接种9～11日龄的鸡胚，可同时羊膜腔接种以增加病毒增殖的可能性。 一般来说，如果样品中有病毒存在，初次传代后就足以产生红细胞凝集作用。如果未检测到血凝活性，需将收获的鸡胚囊液再传一代。 在病毒的分离