第六章酶工程制药3教学幻灯片.pptVIP

二、模拟酶的分类（按属性分） （了解内容） 1.主-客体酶模型 最具代表性的是环糊精（CD），是一种优良的模拟酶。可提供一个疏水的结合部位并能与一些无机和有机分子形成包结络合物，以此影响和催化一些反应。 环糊精的疏水区处于空 穴的内侧，亲水区处 分子的外侧，与酶分子 的微环境十分相似。 空穴本身疏水，能从水 溶液中抽提有机分子， 并将其束缚到空穴中， 这种现象类似于酶将底 物束缚到酶的空穴中。 环糊精对束缚的分子有 选择性，被束缚的分子 要空穴中与之“契合”。 2.胶束模拟酶 近几年比较活跃的领域之一。 胶束在水溶液中提供了疏水微环境（类似于酶的结合部位），可对底物束缚，如果将催化基团如咪唑基、羟基等连接到胶束上，就可以提供“活性中心”部位，使胶束成为具有酶活力的胶束模拟酶。 3.肽酶 模拟天然酶活性部位而人工合成的具有催化活性的多肽。 4.半合成酶 以天然酶为母体，用化学或基因工程的方法引进适当的活性部位或催化基团。 5.印迹酶 分子印迹：指制备对某一特定化合物具有选择性的 聚合物的过程，这个特定化合物叫印迹分子。 原理：生物体特异的分子识别功能。 （1) 直接固定法 （无载体法） 不使用载体，借助物理（如加热、冰冻）、化学方法（如柠檬酸、各种絮凝剂）将细胞直接固定。 一般只用于单酶或少数几种酶催化的反应。 （2)载体结合法：将细胞悬液直接与水不溶性的载体相结合的方法。原理同吸附法。 （3)包埋法：将细胞定位于凝胶网格内的技术。——应用最多的方法。操作方法与包埋酶法相同。 （4）交联法：用多功能试剂对细胞进行交联的固定化方法。——较少使用（所用试剂对细胞毒性较大） 3. 固定化方法 三、固定化方法与载体的选择依据（了解） 1.固定化方法的选择 应考虑以下几个因素： （1）固定化酶应用的安全性：应尽可能选择无毒性试剂参与固定化。 （2）固定化酶在操作中的稳定性：应选择最佳的固定化方法，以制备稳定性高的固定化酶。才能长期反复使用。 （3）固定化的成本：包括水、电、气、设备和劳务投资。 2.载体的选择 最好选择工业化生产中已大量使用的廉价材料为载体。 四、固定化酶和固定化细胞的性状和性质 1、形状 （1）颗粒状固定化酶：包括酶珠、酶块酶片和酶粉。特点：制备方法简单，比表面积大，转化效率高，适用于各种类型的反应器。 （2）纤维状固定化酶：特点：比表面大，转化效率高，但只适用于填充床反应器。 （3）膜状固定化酶：特点：表面积大，渗透阻力小，可用于酶电极，破碎后也可用于填充式反应器。 （4）管状固定化酶：特点：机械强度大，切短后可用于填充床式反应器，也可组装成列管式反应器。 2.固定化酶的性质 （1）酶的活性 ： 通常低于天然酶（有例外）。 如：氨基酰化酶， 70℃，15分钟，酶失去活性。 而固定化后， 70℃，15分钟，有80%活性。 （2）酶的稳定性 酶的耐热性、对变性剂、抑制剂、蛋白酶的抵抗力增加。 可能的原因： ①固定化增加了酶活性构象的牢固程度， 可防止酶分子伸展变形； ②抑制酶的自身降解。 ③固定化部分阻挡了外界不利因素对酶的侵袭。 （3）酶的最适温度 最适温度与酶稳定性有关。 多数酶固定化后热稳定性上升，最适温度也上升（有例外）。 （4）酶的最适pH 带负电荷载体 ：最适pH 向碱性偏移。 带正电荷载体 ：最适pH 向酸性偏移。 （5）酶的动力学特征 Km是表示酶和底物的亲和力大小的客观指标 酶经固定化后，Km一般都增大。 最大反应速度Vm与天然酶接近。 与自然酶基本相同。但大分子底物难于接近酶分子，导致酶的专一性发生改变。 （6）酶的作用专一性 与固定化酶相比，固定化细胞的情况比较复杂。 （1）有活性升高的现象。 （2）稳定性的增加 。 （3）最适温度和最适pH常保持不变。 3、固定化细胞的性质 (1)酶(细胞)的活力 固定化酶通常呈颗粒状，一般用于测定自然酶活力的方法改进后才能用于测定固定化酶。有两种方法：分批测量和连续测量。 五、固定化酶（细胞）的评价指标 (2)偶联率及相对活力 偶联率=(加入蛋白活力一上清液蛋白活力)/加入蛋白活力×100% 活力回收=固定化酶总活力/加入酶的总活力×100% 相对活力=固定化酶总活力/ (加入酶的总活力-上清液中未偶联酶活力)×100% (3)半衰期 在连续测定条件下，固定化酶(细胞)的活力下降为最初活力一半所经历的连续工作时间，以t1/2表示。 是衡量稳定性的一项重要指标。 思考题 一、名词解释 1.固定化酶 2.