2019年土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptVIP

㈤ . 微生物的培养与观察 思考：要将哪些培养皿进行培养？ ㈤ . 微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔 24h 统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果， 以 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数 目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌： 30 ～37℃培养 1 ～ 2d 放线菌： 25 ～28℃培养 5 ～ 7d 霉菌： 25 ～28℃的温度下培养 3 ～ 4d 。 ◆ 如果得到了 2 个或 2 个以上 菌落数目在 30 — — 300 的平板，则说明稀释操作比较成功， 并能够进行菌落的计数，如果 同一稀释倍数 的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不 精确 ，需要重新实验。 微生物的培养与观察 三 . 结果分析与评价 1. 通过对照实验，若培养物有杂菌污染， 菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则 菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出 分解尿素的微生物。 2. 提示：选择每个平板上长有 30 — 300 个 菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。 同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相 差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。 课题 2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数 课题背景 1 、尿素的利用 尿素 是一种重要的 农业氮肥。 尿素 不能直接 被农作物 吸收。 土壤中的细菌将尿素 分解成氨 之 后才能被植物利用。 2 、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们 能合成脲酶 3 、课题 的 目的 -- 土壤中分解尿素的细菌的分离与 计数 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一 . 研究思路 ㈠ . 筛选菌株 ㈡ . 统计菌落数目 ㈢ . 设置对照 1 、实例： DNA 多聚酶链式反应 (PCR 技 术 ) 是一种在体外将 少量 DNA 大 量复制 的技术，此项技术要求 使用 耐高温（ 93 0 C ）的 DNA 聚合 酶。 ㈠ . 筛选菌株 提出的问题 — 如何寻找 耐高温 的酶？ 解决问题的思路 — 寻找 耐高温 环境； 启示： 寻找目的菌种时要根据它对 生存环境的要求 ，到相应的环境 中去寻找。 原理 — 高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌， 耐高温菌种提取耐 高温酶 。 2 、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供 有利于目的菌株生长 的条件 ( 包括 营养、温度、 pH 等 ) ，同时 抑制或阻止其他微 生物 生长。 什么是选择性培养基？ 3 筛选的方法 利用选择培养基进行分离 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO 4` 7H 2 O 2.1g NaH 2 PO 4 1.4g KH 2 PO 4 请设计：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所 需培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源： 葡萄糖、尿素 氮源： 尿素 问：培养基选择分解尿素的微生物的原理是什么？ 培养基的 氮源为尿素 ，只有能合成 脲酶 的微生物才能分解尿素 问 怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 是 分离 尿素 细菌 作对照 判断实验 组培养基 有无选择 性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 目的 结果 只生长分解 尿素的细菌 生长多种 微生物 是 1 、显微镜直接计数： 利用 血球计数板 ，在显微镜下计算一定容积 里样品中微生物的数量。 ㈡ . 统计菌落数目： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点 2. 间接计数法（ 活菌计数法） ⑴原理： 在稀释度足够高时，微生物在固 体培养基上所形成的 一个菌落 是由 一个单 细胞 繁殖而成的，即 一个菌落代表原先的 一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。 每克样品中的菌落数＝ (C ÷ V) × M 其中， C 代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数， V 代表涂布平板时所用的稀释液 的体积 (ml) ， M 代表稀释倍数。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30 —— 300 的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加 到 三个或三个以上 的平