2019年实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法1017.pptVIP

实验六、植物组织中总糖和 还原性糖含量的测定 1 、实验目的 ? 掌握总糖和还原糖含量的测定方法 ? 学习总糖和还原糖提取的方法 2 、实验重点和难点 ? 利用 3,5- 二硝基水杨酸法测定还原糖含量的 实验原理 ? 多糖在酸性加热条件下会降解为还原糖 3 、实验原理 3.1 、还原糖的概念 ? 指含有游离的半缩醛（酮）基糖。单糖都是还原 糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）； 多糖多为非还原糖。 ? 葡萄糖分子中含有游离醛基，果糖分子中含有游 离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基， 故它们都是还原糖。 3.2 、 3,5- 二硝基水杨酸比色法 ? 总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解 度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分 别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用 酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定， 再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。 ? 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产 物， 3,5- 二硝基水杨酸 ( 黄色）则被还原为棕红色 的 3- 氨基 -5- 硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖 的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用 分光光度计，在 540nm 波长下测定光密度值，查对 标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。 ? 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加 入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以 0.9 。 相对密度法 折光法 旋光法 物理法 3.3 、糖含量测定方法 化学法 还原糖法 碘量法 比色法 直接滴定法 ( 改良的兰 — 爱农法） 高锰酸钾法 萨氏法 3 ， 5 — 二硝基水杨酸 酚 — 硫酸法 蒽酮法 半胱氨酸 — 咔唑法 纸色谱 薄层色谱 GC HPLC β— 半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖 葡萄糖氧化酶测葡萄糖 发酵法 —— 测不可发酵糖 重量法 —— 测果胶、纤维素、膳食纤维素 色谱法 酶法 4 、操作步骤 4.1 、制定标准曲线 管号 0 1 2 3 4 5 标准葡萄糖溶液 /mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水 /mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 DNS 试剂 /mL 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 沸水浴中准确煮沸 5min ，取出，用自来水冷却至室温 蒸馏水 /mL 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 葡萄糖浓度 /mg/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 A540 4.2 、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取 (1) 还原糖： 30mL 水冲研 钵 2-3 次 1g 土豆 研成匀浆 3mL 水 三角瓶中 50 ℃ 水浴 0.5h 冷却定到 100mL 混匀 , 过滤 取滤液作为还 原糖提取液 (2) 总糖 ： 1g 土豆 研成匀浆 3mL 水 三角瓶中 沸水浴 0.5h 冷却 , 用 NaOH 中和 , 加水定容 到 100mL 混匀 , 过滤 取滤液作为 总糖提取液 12mL 水冲研 钵 2-3 次 10mL6MHCl I 2 -KI 检测 4.3 、用 3,5- 二硝基水杨酸法测还原糖、 总糖含量 管号 空白对照 还原糖 样液管 总糖样液管 样液 /mL 0 1.0 1.0 水 1.0 0 0 DNS 试剂 /mL 2.0 2.0 2.0 沸水浴中准确煮沸 5min ，取出，用自来水冷却至室温 蒸馏水 /mL 9.0 9.0 9.0 A540